Nutlin-3a(Rebemadlin)作為MDM2拮抗劑在動(dòng)物模型中的研究應(yīng)用

Nutlin-3a（Rebemadlin，AbMole，M2894）是一種MDM2拮抗劑，能通過(guò)特異性阻斷MDM2與腫瘤抑制因子p53之間的相互作用，解除MDM2對(duì)p53的泛素化降解，從而穩(wěn)定p53蛋白水平并激活其下游轉(zhuǎn)錄程序。在野生型TP53細(xì)胞中（如結(jié)腸癌HCT116），10 μM Nutlin-3a處理24小時(shí)可顯著抑制增殖、誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期阻滯及凋亡，同時(shí)下調(diào)β-連環(huán)蛋白、并抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）進(jìn)程，以及減少細(xì)胞遷移[1]。Nutlin-3a（Rebemadlin，AbMole，M2894）還具有非p53依賴(lài)性的細(xì)胞活性，在結(jié)腸癌細(xì)胞（包括p53突變型Caco-2、SW480）中，Nutlin-3a通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活CHOP（一種細(xì)胞應(yīng)激與凋亡相關(guān)的蛋白），上調(diào)死亡受體DR5，并通過(guò)Caspase-8通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[2]；Nutlin-3a（Rebemadlin，AbMole，M2894）還在H1299細(xì)胞（一種p53缺失細(xì)胞）中，與干擾素α（IFN-α） 聯(lián)用后通過(guò)抑制cyclin D1/CDK4阻斷細(xì)胞周期[3]。

Nutlin-3a（10 μM）可以抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡[4]。Nutlin-3a（5 μM）還能通過(guò)誘導(dǎo)AMP激酶活化，激活急性白血病細(xì)胞的自噬[5]。在動(dòng)物模型研究中，小鼠（包括SCID小鼠、裸鼠）異種移植實(shí)驗(yàn)表明，Nutlin-3a（Rebemadlin）可在細(xì)胞水平和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（小鼠）中有效抑制NCI-H295R來(lái)源的腎上腺皮質(zhì)癌、ECA-109來(lái)源的食管鱗癌、GBM10來(lái)源的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（顱內(nèi)模型）及黑色素瘤腫瘤的生長(zhǎng)。此外，Nutlin-3a（25 mg/kg）還可以激活小鼠肺部p53基因的表達(dá)并逆轉(zhuǎn)小鼠的肺動(dòng)脈高壓[6]。

參考文獻(xiàn)及鳴謝
[1] Hui, W.; Liu, S.; Zheng, J.; et al. Nutlin-3a as a novel anticancer agent for adrenocortical carcinoma with CTNNB1 mutation. Cancer medicine 2018, 7 (4), 1440-1449.
[2] Lu, M.; Ren, Y.; Feng, S.; et al. MDM2 inhibitor induces apoptosis in colon cancer cells through activation of the CHOP-DR5 pathway, independent of p53 phenotype. Frontiers in pharmacology 2025, 16, 1508421.
[3] Shuvalov, O.; Kizenko, A.; Shakirova, A.; et al. Nutlin sensitizes lung carcinoma cells to interferon-alpha treatment in MDM2-dependent but p53-independent manner. Biochemical and biophysical research communications 2018, 495 (1), 1233-1239.
[4] Wang, B.; Fang, L.; Zhao, H.; et al. MDM2 inhibitor Nutlin-3a suppresses proliferation and promotes apoptosis in osteosarcoma cells. Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2012, 44 (8), 685-691.
[5] Borthakur, G.; Duvvuri, S.; Ruvolo, V.; et al. MDM2 inhibitor, nutlin 3a, induces p53 dependent autophagy in acute leukemia by AMP kinase activation. 2015, 10 (10), e0139254.
[6] Mouraret, N.; Marcos, E.; Abid, S.; et al. Activation of lung p53 by Nutlin-3a prevents and reverses experimental pulmonary hypertension. 2013, 127 (16), 1664-1676.

細(xì)胞系：U-2 OS
方法：Cells were seeded in duplicate in 96-well plates (104 per well), incubated for 6 h, and treated with 10 μM Nutlin-3a for 24, 48, and 72 h, respectively, or exposed to 0–10 M Nutlin-3a for 48 h. Cell viability was determined using the Luminescent cell viability kit.
濃度：10 μM
處理時(shí)間：24, 48, and 72 h
參考文獻(xiàn)：Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2012 Aug;44(8):685-91.
* 上述方法來(lái)自公開(kāi)文獻(xiàn)，僅供相同目的實(shí)驗(yàn)參考。如實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、材料、方法不同，�?qǐng)參考其他文獻(xiàn)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)參考
動(dòng)物模型：C57Bl/6j mice
配制：0.9% NaCl and 30% DMSO
劑量：6, 12, or 25 mg/Kg/d
給藥處理：Intraperitoneal injection
參考文獻(xiàn)：Circulation. 2013 Apr 23;127(16):1664-76.
* 上述方法來(lái)自公開(kāi)文獻(xiàn)，僅供相同目的實(shí)驗(yàn)參考。如實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、材料、方法不同，�?qǐng)參考其他文獻(xiàn)。
  體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的工作液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，當(dāng)天使用；如在配制過(guò)程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象，可以通過(guò)超聲和（或）加熱的方式助溶。
  切勿一次性將產(chǎn)品全部溶解。
  建議制定動(dòng)物給藥及實(shí)驗(yàn)方案時(shí)，盡量參考已發(fā)表的相關(guān)實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)（溶劑種類(lèi)及配比眾多，簡(jiǎn)單地溶解目的化合物，并不能解決動(dòng)物給藥依從性、體內(nèi)生物利用度、組織分布等相關(guān)問(wèn)題，未必能保證目的化合物在動(dòng)物體內(nèi)充分發(fā)揮生物學(xué)效用）。