ITPRIPL1作為CD3ε抑制性配體在腫瘤免疫逃逸中的新機制與靶向策略

一、研究背景：T細胞活化障礙與免疫治療抵抗
腫瘤免疫治療，特別是免疫檢查點阻斷療法的出現(xiàn)，顯著改變了多種惡性腫瘤的治療格局。然而，仍有大量患者對該療法表現(xiàn)出原發(fā)性或獲得性耐藥。腫瘤微環(huán)境通過復(fù)雜的機制抑制T細胞功能是導(dǎo)致治療失敗的關(guān)鍵因素之一。T細胞受體-CD3復(fù)合物是啟動T細胞活化的核心結(jié)構(gòu)，其中CD3ε亞基貢獻了兩個相同的胞外域。目前，對TCR-CD3復(fù)合物的研究主要集中于激活性的主要組織相容性復(fù)合體-肽配體，而能夠直接抑制該復(fù)合物信號傳導(dǎo)的天然配體尚屬未知。尋找并闡明此類抑制性配體，對于理解腫瘤免疫逃逸新機制和開發(fā)新型免疫療法具有重要意義。

二、核心發(fā)現(xiàn)：ITPRIPL1是CD3ε的新型抑制性配體
近期研究鑒定并驗證了一種名為ITPRIPL1的膜蛋白，是T細胞有效抗腫瘤免疫應(yīng)答的關(guān)鍵抑制因子。

1. 靶點鑒定與表達特征：ITPRIPL1是一種I型跨膜蛋白，在正常組織中表達高度受限，而在包括多種實體瘤在內(nèi)的腫瘤組織中呈現(xiàn)廣泛過表達，尤其在程序性死亡配體1低表達或無表達的腫瘤中更為普遍。

2. 作用機制闡明：研究發(fā)現(xiàn)，ITPRIPL1的胞外結(jié)構(gòu)域能夠直接與T細胞表面的CD3ε亞基結(jié)合。這一結(jié)合在T細胞活化的最早期階段（即"信號一"）即產(chǎn)生抑制作用，表現(xiàn)為顯著降低T細胞受體信號觸發(fā)的鈣離子內(nèi)流，并阻礙下游關(guān)鍵激酶ZAP70的磷酸化。該信號阻斷過程涉及Nck、ZAP70等分子的相互作用，最終導(dǎo)致細胞外信號調(diào)節(jié)激酶和核因子κB等關(guān)鍵通路的活化受阻，從而全面抑制T細胞的初始活化和功能。

3. 體內(nèi)外功能驗證：在多種實體瘤的小鼠模型中，使用中和性的抗ITPRIPL1單克隆抗體進行治療，能夠有效抑制腫瘤生長，并促進腫瘤微環(huán)境中效應(yīng)T細胞的浸潤與活化。這一抗腫瘤效應(yīng)在寵物犬自然發(fā)生的腫瘤臨床治療中也得到驗證，展現(xiàn)出顯著的轉(zhuǎn)化潛力。

三、研究工具：Biotinylated CD3E&CD3D Fc, His, Avi tag&Fc, Flag, Avi tag 蛋白的應(yīng)用價值
在揭示ITPRIPL1與CD3ε相互作用及后續(xù)信號機制的研究中，設(shè)計精良、功能明確的重組蛋白復(fù)合物是進行精確分子互作分析和功能驗證的關(guān)鍵工具。Biotinylated CD3E&CD3D Fc, His, Avi tag&Fc, Flag, Avi tag 蛋白 作為此類研究的代表，其復(fù)合設(shè)計與多重標(biāo)簽系統(tǒng)提供了獨特優(yōu)勢：

1. 復(fù)合物模擬與穩(wěn)定性：該蛋白制劑模擬了CD3ε與CD3δ在天然TCR-CD3復(fù)合物中的異源二聚體形式，更真實地反映其在細胞膜上的天然構(gòu)象。Fc標(biāo)簽的融合不僅增強了蛋白的穩(wěn)定性和溶解性，也便于通過Protein A/G進行高效固定化，用于互作研究。

2. 多重親和標(biāo)簽與檢測靈活性：整合的His標(biāo)簽、Flag標(biāo)簽便于進行不同策略的親和純化與免疫檢測。預(yù)先位點特異性偶聯(lián)的生物素標(biāo)記（通過Avi標(biāo)簽實現(xiàn)）可與鏈霉親和素系統(tǒng)結(jié)合，實現(xiàn)超高親和力的固相化，特別適用于表面等離子共振、生物膜干涉技術(shù)等需要極低背景和高穩(wěn)定性的高精度結(jié)合動力學(xué)分析，以精確測定ITPRIPL1與CD3ε/CD3δ復(fù)合物的結(jié)合常數(shù)。

3. 核心應(yīng)用場景：
- 高精度結(jié)合驗證：作為標(biāo)準(zhǔn)化的受體復(fù)合物，用于通過SPR/BLI等技術(shù)直接、定量地驗證ITPRIPL1胞外區(qū)與之的結(jié)合，并評估候選中和抗體的競爭性抑制效率。
- 信號復(fù)合物研究：可用于Pull-down或免疫共沉淀實驗，探究ITPRIPL1結(jié)合后是否以及如何影響CD3復(fù)合物與下游信號分子（如Nck、ZAP70）的相互作用。
- 抗體篩選與表征平臺：作為抗原，用于高通量篩選靶向CD3ε-ITPRIPL1相互作用界面的單克隆抗體或小分子抑制劑。

四、提供Biotinylated CD3E&CD3D Fc, His, Avi tag&Fc, Flag, Avi tag 蛋白的廠商有哪些？
南京優(yōu)愛蛋白自主研發(fā)的 Biotinylated CD3E&CD3D Fc, His, Avi tag&Fc, Flag, Avi tag Protein, Human（貨號：UA011360），是一款結(jié)構(gòu)高度復(fù)雜、功能精準(zhǔn)模擬的工程化T細胞受體（TCR）復(fù)合物亞基蛋白，專為下一代T細胞導(dǎo)向療法（如雙特異性抗體、CAR-T）的研發(fā)與評價而設(shè)計。本品通過共表達并純化人源CD3ε-CD3δ異源二聚體復(fù)合物，其中兩個亞基分別攜帶不同的標(biāo)簽組合，并實現(xiàn)了高效的位點特異性生物素標(biāo)記，以模擬T細胞表面TCR-CD3復(fù)合物的關(guān)鍵識別與信號模塊。

ITPRIPL1作為CD3ε抑制性配體在腫瘤免疫逃逸中的新機制與靶向策略-南京優(yōu)愛(UA BIO), 重組蛋白專家