ABDP 493/503是一種非常實(shí)用的中性脂滴熒光探針,它因其高選擇性、良好的光穩(wěn)定性和對(duì)pH不敏感的特性,成為脂代謝研究中的重要工具。
化學(xué)性質(zhì)當(dāng)染料進(jìn)入脂滴的疏水環(huán)境后,其熒光強(qiáng)度會(huì)顯著增強(qiáng)。因此,在熒光顯微鏡下,可以看到脂滴發(fā)出明亮的綠色熒光。與尼羅紅(Nile Red)等其他親脂性染料相比,ABDP 493/503對(duì)環(huán)境的極性和pH值相對(duì)不敏感,在不同生理?xiàng)l件下能保持穩(wěn)定的熒光特性,因此具有更高的選擇性。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析:結(jié)合流式細(xì)胞術(shù),能夠?qū)?xì)胞群體中脂滴的含量進(jìn)行定量分析,用于研究細(xì)胞脂質(zhì)代謝狀態(tài)或分選特定類(lèi)型的細(xì)胞。
肝脂肪變性研究:在肝臟研究中,該探針被用于評(píng)估高脂肪飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性動(dòng)物模型,幫助區(qū)分微泡性和大泡性脂肪變性,為肝病研究提供重要工具。
脂滴動(dòng)態(tài)過(guò)程研究:憑借其良好的光穩(wěn)定性和細(xì)胞相容性,ABDP 493/503還可用于研究活細(xì)胞中脂滴的形成、融合以及與其他細(xì)胞器的相互作用等動(dòng)態(tài)過(guò)程。
使用建議與注意事項(xiàng)
工作液配置:通常先用DMSO配制1-5 mM的儲(chǔ)存液,使用時(shí)再用適當(dāng)?shù)木彌_液(如PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基)稀釋成1-5 μM的工作液。工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
染色步驟:對(duì)于貼壁細(xì)胞,棄去培養(yǎng)基后用PBS清洗,加入染料工作液覆蓋細(xì)胞,37°C避光孵育5-30分鐘。隨后去除染料工作液,用預(yù)溫的培養(yǎng)液或PBS清洗細(xì)胞2-3次后即可觀察。
設(shè)置對(duì)照:建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照(例如用油酸處理細(xì)胞以誘導(dǎo)脂滴生成)以確保染色效果。
避光操作:所有操作步驟應(yīng)盡量避光進(jìn)行,以減緩熒光淬滅。
圖像采集:使用FITC或GFP的濾光片設(shè)置進(jìn)行圖像采集。