膿毒性腦病中動(dòng)力相關(guān)蛋白1（Drp1）介導(dǎo)的線粒體功能障礙研究

膿毒癥，一種由感染觸發(fā)的全身炎癥性反應(yīng)綜合征，常導(dǎo)致多器官損傷及長(zhǎng)期發(fā)病率和死亡率的上升。其中，膿毒癥相關(guān)性腦�。⊿AE）作為膿毒癥患者的嚴(yán)重并發(fā)癥，尤其值得關(guān)注。SAE常見(jiàn)于嚴(yán)重體內(nèi)感染而中樞神經(jīng)系統(tǒng)未明顯受累的病人，臨床上與高死亡率緊密相關(guān)。

盡管膿毒癥性腦病的病理生物學(xué)機(jī)制尚未完全明了，但已有多種假說(shuō)提出。當(dāng)前研究認(rèn)為，腦灌注障礙和氧合失調(diào)導(dǎo)致的血腦屏障（BBB）改變，在膿毒癥引發(fā)的神經(jīng)功能障礙中扮演重要角色。此外，“細(xì)胞病理性缺氧”，即膿毒癥中細(xì)胞生物能量學(xué)的干擾，特別是線粒體損傷，已被揭示為影響終末器官衰竭和最終死亡率的關(guān)鍵因素。線粒體衰竭的作用不僅與膿毒癥性腦病相關(guān)，還與其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如中風(fēng)、阿爾茨海默�。ˋD）、帕金森�。≒D）、亨廷頓病和癲癇中的BBB功能障礙有關(guān)。

值得注意的是，先前研究已證實(shí)肽P110的治療潛力。這是一種由7個(gè)氨基酸組成的肽，代表動(dòng)力相關(guān)蛋白1（Drp1）和Fission 1蛋白（Fis1）之間的同源序列，能夠減少多種神經(jīng)退行性疾病中的病理性線粒體功能障礙。近期，美國(guó)斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究進(jìn)一步評(píng)估了Drp1/Fis1相互作用在膿毒癥情況下對(duì)線粒體衰竭及隨后BBB功能障礙的介導(dǎo)作用，為膿毒癥性腦病的治療提供了新的視角。

Drp1-Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙：LPS誘導(dǎo)腦微血管通透性的核心機(jī)制
在脂多糖（LPS）處理（濃度為0.1 μg/ml，持續(xù)24小時(shí)）后，與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞展現(xiàn)出顯著的促炎表型轉(zhuǎn)變，并激活了影響血管內(nèi)皮通透性的關(guān)鍵介質(zhì)（見(jiàn)圖1a）。此變化與病理性線粒體分裂蛋白Drp1的激活密切相關(guān)，其通過(guò)絲氨酸616位點(diǎn)的磷酸化水平升高得以體現(xiàn)，標(biāo)志著線粒體向分裂狀態(tài)轉(zhuǎn)變（見(jiàn)圖1b）。

進(jìn)一步觀察顯示，LPS處理導(dǎo)致微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的線粒體受損，伴隨血腦屏障（BBB）完整性喪失。這與線粒體特異性超氧化物生成（MitoSox檢測(cè)）、總氧化應(yīng)激水平上升以及線粒體膜電位（TMRE檢測(cè)）降低相關(guān)聯(lián)（見(jiàn)圖1c-f）。

值得注意的是，通過(guò)P110處理能夠有效改善LPS介導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能紊亂。P110限制了影響血管內(nèi)皮通透性的關(guān)鍵酶的激活，同時(shí)也抑制了Drp1的激活及其在線粒體的定位。此外，P110處理促進(jìn)了BBB完整性的恢復(fù)，改善了線粒體健康狀態(tài)，表現(xiàn)為氧化應(yīng)激水平降低和線粒體膜電位的提升（見(jiàn)圖1）。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了Drp1-Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙在LPS誘導(dǎo)的腦微血管通透性增加中的關(guān)鍵作用，并為潛在的治療干預(yù)提供了依據(jù)。

抑制Drp1-Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙：預(yù)防LPS誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的新策略
在原代神經(jīng)元的評(píng)估中，LPS處理導(dǎo)致了顯著的線粒體損傷，具體表現(xiàn)為氧化磷酸化過(guò)程受阻，并促使細(xì)胞代謝轉(zhuǎn)向糖酵解途徑。線粒體膜電位的下降以及腺苷三磷酸（ATP）生成量的減少進(jìn)一步證實(shí)了線粒體受損的情況（見(jiàn)圖2 a-c）。與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞類似，LPS處理的原代神經(jīng)元中Drp1的活化程度及其在線粒體的定位均有所增加，這凸顯了在膿毒癥環(huán)境下Drp1對(duì)線粒體功能衰竭進(jìn)展的關(guān)鍵作用。此外，LPS處理還導(dǎo)致p53與線粒體膜的結(jié)合增強(qiáng)，進(jìn)而增加了細(xì)胞死亡率（通過(guò)LDH檢測(cè)）。

進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持了Drp1-Fis1在LPS刺激下線粒體功能紊亂中的核心作用。具體而言，肽P110處理的神經(jīng)元展現(xiàn)出了線粒體功能的改善，以及隨之而來(lái)的糖酵解途徑依賴減少，這導(dǎo)致了ATP生成量的增加。更重要的是，P110處理通過(guò)有效抑制p53的活化及其引發(fā)的細(xì)胞死亡，成功消除了LPS處理的下游負(fù)面效應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)為通過(guò)抑制Drp1-Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙來(lái)預(yù)防LPS誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷提供了新策略。

抑制Drp1/Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙對(duì)膿毒性腦病小鼠模型具有保護(hù)作用
在5至7周齡的雌性BALB/c小鼠中，采用已確立的膿毒癥LPS模型，實(shí)驗(yàn)深入探究了Drp1/Fis1相互作用在膿毒癥所致腦病中的關(guān)鍵作用。結(jié)果顯示，膿毒癥小鼠的腦組織線粒體功能顯著受損，具體表現(xiàn)為氧化應(yīng)激水平升高和ATP含量下降，而這一現(xiàn)象在P110處理后得到了顯著改善（見(jiàn)圖3 b、c）。

在評(píng)估血腦屏障（BBB）完整性時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)LPS處理導(dǎo)致構(gòu)成血管緊密連接的關(guān)鍵蛋白質(zhì)ZO-1和occludin顯著減少，同時(shí)血管白細(xì)胞粘附分子VCAM-1和ICAM-1表達(dá)上調(diào)，這明確指示了BBB完整性的受損。值得注意的是，P110處理有效逆轉(zhuǎn)了這些變化，恢復(fù)了BBB的完整性（見(jiàn)圖3 d-h）。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了抑制Drp1/Fis1介導(dǎo)的線粒體功能障礙在膿毒性腦病治療中的潛在保護(hù)作用。



抑制Drp1/Fis1相互作用減輕膿毒癥小鼠腦組織線粒體功能紊亂與降低死亡率
與使用細(xì)胞培養(yǎng)模型所得結(jié)果相一致，LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠腦組織中線粒體功能紊亂與Drp1的激活密切相關(guān)，具體表現(xiàn)為Drp1磷酸化水平上升以及其在線粒體的定位增加。這些變化伴隨著細(xì)胞死亡通路的激活，特別是線粒體細(xì)胞色素C的釋放，這是一種強(qiáng)效的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子（見(jiàn)圖4 a-c）。通過(guò)P110抑制Drp1/Fis1相互作用，有效降低了膿毒癥小鼠線粒體細(xì)胞色素C的釋放水平，并減輕了神經(jīng)炎癥，表現(xiàn)為腫瘤壞死因子TNFα、白介素ILI-β和白介素IL-6等炎癥標(biāo)志物的水平下降（見(jiàn)圖4 d-f）。

在評(píng)估敗血癥小鼠模型的疾病嚴(yán)重程度和死亡率時(shí)，P110處理顯著減輕了臨床疾病的表現(xiàn)，體重減輕程度大幅減少，且體重恢復(fù)速度更快（見(jiàn)圖4 g）。尤為重要的是，與僅接受LPS處理的小鼠相比，P110處理在48小時(shí)至94小時(shí)的觀察期間內(nèi)，將死亡率降低了50%（見(jiàn)圖4 h）。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了抑制Drp1/Fis1相互作用在減輕膿毒癥小鼠腦組織線粒體功能紊亂、降低神經(jīng)炎癥以及提高生存率方面的潛在療效。

綜上所述，本研究有力地證明了Drp1/Fis1相互作用是膿毒癥相關(guān)性腦�。⊿AE）發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過(guò)這一發(fā)現(xiàn)，我們確定了一種具有潛力的新型治療策略，旨在降低SAE相關(guān)的高死亡率和發(fā)病率風(fēng)險(xiǎn)。然而，為了全面評(píng)估這一機(jī)制途徑和治療靶點(diǎn)在減輕膿毒癥環(huán)境下神經(jīng)元損傷方面的實(shí)際價(jià)值，未來(lái)有必要開展大型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究。這些后續(xù)研究將對(duì)于推動(dòng)SAE治療策略的進(jìn)步具有重要意義。