乙莫克舍Etomoxir-MCE
乙莫克舍Etomoxir ((R)-(+)-乙莫克舍Etomoxir) 是肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 1a (CPT-1a) 抑制劑，通過抑制 CPT-1a 可抑制脂肪酸氧化，并抑制人、大鼠和豚鼠中棕櫚酸酯的氧化。
MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報(bào)，我們不為任何個(gè)人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
生物活性
體外研究
乙莫克舍Etomoxir 不可逆地結(jié)合 CPT-1 的催化位點(diǎn)，抑制其活性，但也上調(diào)脂肪酸氧化酶。乙莫克舍Etomoxir 被開發(fā)為位于線粒體外膜上的線粒體肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1 (CPT-1) 的抑制劑。乙莫克舍Etomoxir，在肝臟中可以作為過氧化物酶體增殖劑，增加 DNA 合成和肝臟生長。因此，除了作為 CPT1 抑制劑之外，依托莫克還可被視為 PPARalpha 激動(dòng)劑[1]。乙莫克舍Etomoxir 是羧酸肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 I 抑制劑的成員，已被建議作為針對(duì)心力衰竭的抑制劑。急性 乙莫克舍Etomoxir 處理不可逆地抑制肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 I 的活性。結(jié)果，脂肪酸輸入線粒體和 β-氧化減少，而胞質(zhì)脂肪酸積累和葡萄糖氧化升高。與 乙莫克舍Etomoxir 長時(shí)間孵育 (24 小時(shí)) 對(duì)幾種代謝酶的表達(dá)產(chǎn)生不同的影響[2]。
體內(nèi)研究
乙莫克舍Etomoxir 是游離脂肪酸 (FFA) 氧化相關(guān)關(guān)鍵酶 CPT1 的抑制劑。P53 直接與 Bax 相互作用，Bax 被 乙莫克舍Etomoxir 抑制，進(jìn)一步證實(shí)了 P53 和 Bax 的直接相互作用，以及 db/db 小鼠中 FAO 介導(dǎo)的線粒體 ROS 生成的參與[3]。大鼠每天注射 乙莫克舍Etomoxir，一種特定的 CPT-I 抑制劑，持續(xù) 8 天，劑量為 20 mg/kg 體重。乙莫克舍Etomoxir 處理的大鼠顯示心臟 CPT-I 活性降低 44%。用 20 mg/kg 乙莫克舍Etomoxir 處理 Lewis 大鼠 8 天不會(huì)改變血糖水平，這與類似的 乙莫克舍Etomoxir 喂養(yǎng)研究一致。同樣，乙莫克舍Etomoxir 喂養(yǎng)不會(huì)影響體重增加等一般生長特征，也不會(huì)影響后肢肌肉質(zhì)量。然而，在 乙莫克舍Etomoxir 處理的大鼠中，心臟質(zhì)量和肝臟質(zhì)量均顯著增加了 11%[4]。
實(shí)驗(yàn)參考方法
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)[2]
大鼠心肌成肌細(xì)胞H9c2在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至近融合狀態(tài)。部分實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞先在無血清DMEM中預(yù)孵育2小時(shí)（含或不含1–80 μM依拖莫西爾），隨后加入0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（10 μCi/皿，與BSA按1:1摩爾比結(jié)合）再孵育2小時(shí)。另一些實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞先預(yù)孵育2小時(shí)（含或不含40 μM依拖莫西爾），隨后加入以下同位素標(biāo)記底物之一孵育2小時(shí)：0.1 μM 或 0.1 mM [1,3-³H]甘油（10 μCi/皿）、0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（2 μCi/皿，1:1結(jié)合BSA）、0.1 mM [1-¹⁴C]棕櫚酸（2 μCi/皿，1:1結(jié)合BSA）、28 μM [甲基-³H]膽堿（2 μCi/皿）、0.4 mM [³H]絲氨酸（20 μCi/皿）或40 μM 肌醇-[³H]（10 μCi/皿）。孵育結(jié)束后棄去培養(yǎng)基，用冰冷生理鹽水洗滌細(xì)胞兩次，再以2 mL甲醇–水（v/v, 1:1）裂解并收集細(xì)胞用于脂質(zhì)提取。取部分勻漿液測(cè)定細(xì)胞對(duì)放射性物質(zhì)的總攝取量；隨后分離磷脂組分，并檢測(cè)其放射性強(qiáng)度。
MCE未獨(dú)立驗(yàn)證上述方法的準(zhǔn)確性，僅供參考。
動(dòng)物給藥[3][4]
小鼠實(shí)驗(yàn) [3]
本研究共使用80只雄性C57BLKS/J leprdb/db（db/db）糖尿病小鼠及20只同窩野生型（WT）對(duì)照小鼠（8周齡）。db/db小鼠隨機(jī)分為四組：db/db對(duì)照組、依拖莫西爾組、MitoQ組和PFT-α組。
依拖莫西爾組：腹腔注射依拖莫西爾（1 mg/kg），每周兩次；
MitoQ組：飲水中添加50 μM MitoQ（水瓶用錫箔紙包裹避光，每3天更換一次）；
PFT-α組：腹腔注射PFT-α（1 mg/kg），每周兩次；
WT小鼠給予相應(yīng)溶劑對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)周期為8周。末期采集外周血及骨髓細(xì)胞用于后續(xù)分析。
大鼠實(shí)驗(yàn) [4]
選用體重150–200 g的雄性Lewis大鼠。動(dòng)物飼養(yǎng)于12 h:12 h明暗循環(huán)環(huán)境中，自由攝食標(biāo)準(zhǔn)Purina飼料及飲水。大鼠隨機(jī)分為兩組：（1）對(duì)照組；（2）依拖莫西爾組。依拖莫西爾以20 mg/kg體重劑量溶于0.9%（w/v）NaCl溶液，腹腔注射，連續(xù)給藥8天；對(duì)照組給予等體積生理鹽水。末次給藥于實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)完成。
MCE未獨(dú)立驗(yàn)證上述方法的準(zhǔn)確性，僅供參考。
參考文獻(xiàn)
[1]. Rupp H, et al. The use of partial fatty acid oxidation inhibitors for metabolic therapy of angina pectoris and heart failure. Herz. 2002 Nov;27(7):621-36.
[2]. Xu FY, et al. 乙莫克舍Etomoxir mediates differential metabolic channeling of fatty acid and glycerol precursors into cardiolipin in H9c2 cells. J Lipid Res. 2003 Feb;44(2):415-23.
[3]. Li J, et al. FFA-ROS-P53-mediated mitochondrial apoptosis contributes to reduction of osteoblastogenesis and bone mass in type 2 diabetes mellitus. Sci Rep. 2015 Jul 31;5:12724.
[4]. Luiken JJ, et al. 乙莫克舍Etomoxir-induced partial carnitine palmitoyltransferase-I (CPT-I) inhibition in vivo does not alter cardiac long-chain fatty acid uptake and oxidation rates. Biochem J. 2009 Apr 15;419(2):447-55.
MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報(bào)，我們不為任何個(gè)人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
生物活性
體外研究
乙莫克舍Etomoxir 不可逆地結(jié)合 CPT-1 的催化位點(diǎn)，抑制其活性，但也上調(diào)脂肪酸氧化酶。乙莫克舍Etomoxir 被開發(fā)為位于線粒體外膜上的線粒體肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1 (CPT-1) 的抑制劑。乙莫克舍Etomoxir，在肝臟中可以作為過氧化物酶體增殖劑，增加 DNA 合成和肝臟生長。因此，除了作為 CPT1 抑制劑之外，依托莫克還可被視為 PPARalpha 激動(dòng)劑[1]。乙莫克舍Etomoxir 是羧酸肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 I 抑制劑的成員，已被建議作為針對(duì)心力衰竭的抑制劑。急性 乙莫克舍Etomoxir 處理不可逆地抑制肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 I 的活性。結(jié)果，脂肪酸輸入線粒體和 β-氧化減少，而胞質(zhì)脂肪酸積累和葡萄糖氧化升高。與 乙莫克舍Etomoxir 長時(shí)間孵育 (24 小時(shí)) 對(duì)幾種代謝酶的表達(dá)產(chǎn)生不同的影響[2]。
體內(nèi)研究
乙莫克舍Etomoxir 是游離脂肪酸 (FFA) 氧化相關(guān)關(guān)鍵酶 CPT1 的抑制劑。P53 直接與 Bax 相互作用，Bax 被 乙莫克舍Etomoxir 抑制，進(jìn)一步證實(shí)了 P53 和 Bax 的直接相互作用，以及 db/db 小鼠中 FAO 介導(dǎo)的線粒體 ROS 生成的參與[3]。大鼠每天注射 乙莫克舍Etomoxir，一種特定的 CPT-I 抑制劑，持續(xù) 8 天，劑量為 20 mg/kg 體重。乙莫克舍Etomoxir 處理的大鼠顯示心臟 CPT-I 活性降低 44%。用 20 mg/kg 乙莫克舍Etomoxir 處理 Lewis 大鼠 8 天不會(huì)改變血糖水平，這與類似的 乙莫克舍Etomoxir 喂養(yǎng)研究一致。同樣，乙莫克舍Etomoxir 喂養(yǎng)不會(huì)影響體重增加等一般生長特征，也不會(huì)影響后肢肌肉質(zhì)量。然而，在 乙莫克舍Etomoxir 處理的大鼠中，心臟質(zhì)量和肝臟質(zhì)量均顯著增加了 11%[4]。
實(shí)驗(yàn)參考方法
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)[2]
大鼠心肌成肌細(xì)胞H9c2在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至近融合狀態(tài)。部分實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞先在無血清DMEM中預(yù)孵育2小時(shí)（含或不含1–80 μM依拖莫西爾），隨后加入0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（10 μCi/皿，與BSA按1:1摩爾比結(jié)合）再孵育2小時(shí)。另一些實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞先預(yù)孵育2小時(shí)（含或不含40 μM依拖莫西爾），隨后加入以下同位素標(biāo)記底物之一孵育2小時(shí)：0.1 μM 或 0.1 mM [1,3-³H]甘油（10 μCi/皿）、0.1 mM [1-¹⁴C]油酸（2 μCi/皿，1:1結(jié)合BSA）、0.1 mM [1-¹⁴C]棕櫚酸（2 μCi/皿，1:1結(jié)合BSA）、28 μM [甲基-³H]膽堿（2 μCi/皿）、0.4 mM [³H]絲氨酸（20 μCi/皿）或40 μM 肌醇-[³H]（10 μCi/皿）。孵育結(jié)束后棄去培養(yǎng)基，用冰冷生理鹽水洗滌細(xì)胞兩次，再以2 mL甲醇–水（v/v, 1:1）裂解并收集細(xì)胞用于脂質(zhì)提取。取部分勻漿液測(cè)定細(xì)胞對(duì)放射性物質(zhì)的總攝取量；隨后分離磷脂組分，并檢測(cè)其放射性強(qiáng)度。
MCE未獨(dú)立驗(yàn)證上述方法的準(zhǔn)確性，僅供參考。
動(dòng)物給藥[3][4]
小鼠實(shí)驗(yàn) [3]
本研究共使用80只雄性C57BLKS/J leprdb/db（db/db）糖尿病小鼠及20只同窩野生型（WT）對(duì)照小鼠（8周齡）。db/db小鼠隨機(jī)分為四組：db/db對(duì)照組、依拖莫西爾組、MitoQ組和PFT-α組。
依拖莫西爾組：腹腔注射依拖莫西爾（1 mg/kg），每周兩次；
MitoQ組：飲水中添加50 μM MitoQ（水瓶用錫箔紙包裹避光，每3天更換一次）；
PFT-α組：腹腔注射PFT-α（1 mg/kg），每周兩次；
WT小鼠給予相應(yīng)溶劑對(duì)照。
實(shí)驗(yàn)周期為8周。末期采集外周血及骨髓細(xì)胞用于后續(xù)分析。
大鼠實(shí)驗(yàn) [4]
選用體重150–200 g的雄性Lewis大鼠。動(dòng)物飼養(yǎng)于12 h:12 h明暗循環(huán)環(huán)境中，自由攝食標(biāo)準(zhǔn)Purina飼料及飲水。大鼠隨機(jī)分為兩組：（1）對(duì)照組；（2）依拖莫西爾組。依拖莫西爾以20 mg/kg體重劑量溶于0.9%（w/v）NaCl溶液，腹腔注射，連續(xù)給藥8天；對(duì)照組給予等體積生理鹽水。末次給藥于實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)完成。
MCE未獨(dú)立驗(yàn)證上述方法的準(zhǔn)確性，僅供參考。
參考文獻(xiàn)
[1]. Rupp H, et al. The use of partial fatty acid oxidation inhibitors for metabolic therapy of angina pectoris and heart failure. Herz. 2002 Nov;27(7):621-36.
[2]. Xu FY, et al. 乙莫克舍Etomoxir mediates differential metabolic channeling of fatty acid and glycerol precursors into cardiolipin in H9c2 cells. J Lipid Res. 2003 Feb;44(2):415-23.
[3]. Li J, et al. FFA-ROS-P53-mediated mitochondrial apoptosis contributes to reduction of osteoblastogenesis and bone mass in type 2 diabetes mellitus. Sci Rep. 2015 Jul 31;5:12724.
[4]. Luiken JJ, et al. 乙莫克舍Etomoxir-induced partial carnitine palmitoyltransferase-I (CPT-I) inhibition in vivo does not alter cardiac long-chain fatty acid uptake and oxidation rates. Biochem J. 2009 Apr 15;419(2):447-55.
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