均相技術(shù)的工作原理、優(yōu)勢(shì)及在表觀遺傳學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用

表觀遺傳學(xué)檢測(cè)技術(shù)挑戰(zhàn)
表觀遺傳修飾包括DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑和非編碼RNA調(diào)控等多種形式。這些修飾的研究面臨諸多技術(shù)挑戰(zhàn)：需要高靈敏度以檢測(cè)低豐度修飾，高特異性以區(qū)分相似修飾狀態(tài)，以及能夠在接近生理狀態(tài)的條件下進(jìn)行研究的能力。

均相檢測(cè)技術(shù)工作原理/優(yōu)勢(shì)
傳統(tǒng)方法如質(zhì)譜、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA）和染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）等往往操作繁瑣、通量低或需要破壞性樣品處理。

瑞孚迪（Revvity）技術(shù)作為均相檢測(cè)平臺(tái)，克服了這些限制，為表觀遺傳學(xué)研究提供了新的解決方案。無(wú)需洗滌步驟，適用于高通量篩選，并能在接近生理?xiàng)l件下進(jìn)行研究。

01、HTRF（均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)）
基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），由供體（銪/鋱穴狀化合物）和受體（d2/XL665）組成。當(dāng)兩者距離<10nm時(shí)，供體能量轉(zhuǎn)移至受體，產(chǎn)生特征發(fā)射光。結(jié)合時(shí)間分辨熒光（TRF）技術(shù)，消除背景干擾，提高信噪比。

02、Alpha（放大發(fā)光鄰近均相檢測(cè)技術(shù)）
基于單線態(tài)氧能量轉(zhuǎn)移，由供體珠（包被光敏劑）和受體珠（含化學(xué)發(fā)光劑）組成。當(dāng)生物分子相互作用使微珠接近時(shí)，激光激發(fā)產(chǎn)生單線態(tài)氧，觸發(fā)化學(xué)發(fā)光。由于氧擴(kuò)散距離短（~200nm），背景極低，適合大分子復(fù)合物檢測(cè)。

均相檢測(cè)技術(shù)具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
Ø 高靈敏度：可檢測(cè)低豐度表觀遺傳修飾
Ø 高特異性：能區(qū)分細(xì)微的修飾狀態(tài)差異
Ø 均相檢測(cè)：無(wú)需洗滌步驟，操作簡(jiǎn)便
Ø 高通量：適合384甚至1536孔板，實(shí)現(xiàn)快速篩選
Ø 寬動(dòng)態(tài)范圍：可高達(dá)6個(gè)數(shù)量級(jí)

生化水平表觀遺傳學(xué)檢測(cè)
1. 表觀甲基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)是一種通用的生化檢測(cè)，用于檢測(cè)組蛋白（HMTs）和DNA （DNMTs）甲基轉(zhuǎn)移酶家族在酶反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的s -腺苷型同型半胱氨酸（SAH）-水平以反應(yīng)酶活變化。

HTRF甲基轉(zhuǎn)移酶試劑盒檢測(cè)原理
2. 組蛋白修飾分析是均相檢測(cè)試劑的另一重要應(yīng)用。瑞孚迪提供了一系列工具箱試劑，通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)特定修飾位點(diǎn)的抗體（如H3K27me3、H3K9ac等），能夠準(zhǔn)確檢測(cè)組蛋白H3甲基轉(zhuǎn)移酶（HMT）、去甲基化酶（HDM）和去乙酰化酶（HDAC）等多種修飾酶的活性，并有效區(qū)分單甲基化、雙甲基化和三甲基化等不同修飾狀態(tài)。采用生物素化的組蛋白肽底物，結(jié)合鏈霉親和素供體系統(tǒng)，與甲基特異性肽（如未甲基化、單甲基化、二甲基化或三甲基化肽）的濃度成正比，實(shí)現(xiàn)高靈敏度定量。

已驗(yàn)證數(shù)據(jù)

HTRF表觀遺傳學(xué)生化水平檢測(cè)原理圖

細(xì)胞水平表觀遺傳學(xué)檢測(cè)
瑞孚迪的 EPIgeneous 細(xì)胞水平表觀修飾測(cè)定試劑盒采用均相檢測(cè)技術(shù)，無(wú)需分離純化，只需裂解細(xì)胞即可直接測(cè)量貼壁或懸浮細(xì)胞內(nèi)的組蛋白甲基化、乙�；�及總蛋白水平，提高檢測(cè)效率。相比Western blot，均相檢測(cè)技術(shù)能節(jié)省75%時(shí)間，更適合高通量篩選，加速了表觀遺傳靶向藥物的開(kāi)發(fā)進(jìn)程。(一鍵直達(dá)TrypLUS消化液開(kāi)瓶即傳代：消化液的“常溫”革命！）

Alpha表觀遺傳學(xué)細(xì)胞水平檢測(cè)原理圖

均相檢測(cè)技術(shù)作為表觀遺傳學(xué)研究的重要工具，從生化水平到細(xì)胞水平提供了全面解決方案。其高靈敏度、高特異性和高通量特點(diǎn)，使其在機(jī)制研究、藥物發(fā)現(xiàn)和臨床應(yīng)用中展現(xiàn)出獨(dú)特價(jià)值。隨著技術(shù)的不斷創(chuàng)新和優(yōu)化，均相檢測(cè)技術(shù)必將繼續(xù)推動(dòng)表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展，為理解生命本質(zhì)和開(kāi)發(fā)新型療法做出重要貢獻(xiàn)。

產(chǎn)品列表

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