Megazyme氨測(cè)定試劑盒（快速）使用說(shuō)明書(shū)
簡(jiǎn)介：
氨是一種廣泛存在的天然化合物，通常由微生物蛋白質(zhì)分解代謝產(chǎn)生，因此可作為果汁、牛奶、奶酪、肉類(lèi)、海鮮和面包制品的質(zhì)量指標(biāo)。與其他一些試劑盒不同，這種試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是使用了谷氨酸脫氫酶，這種酶不受單寧的抑制，例如葡萄汁和葡萄酒。K-AMIAR可用于手動(dòng)測(cè)定氨（見(jiàn)第4頁(yè)“A”）、自動(dòng)分析儀格式（見(jiàn)第6頁(yè)“B”）或微孔板格式（見(jiàn)第7頁(yè)“C”）。在葡萄酒工業(yè)中，氨的測(cè)定是計(jì)算酵母有效氮（YAN）的重要環(huán)節(jié)。YAN包含三種高度可變的成分，游離銨離子、初級(jí)氨基氮（來(lái)自游離氨基酸）和L-精氨酸側(cè)鏈的貢獻(xiàn)。因此，為了最準(zhǔn)確地測(cè)定YAN，應(yīng)該對(duì)所有三種成分進(jìn)行定量，這可以使用Megazyme的L-精氨酸/尿素/氨試劑盒（K-LARGE）和NOPA試劑盒（K-PANOPA）。1
原則：
在谷氨酸脫氫酶（GlDH）和還原煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）存在下，氨（銨離子；NH）與2-酮戊二酸反應(yīng)生成L-谷氨酸和NADP（1）。4++
（GlDH公司）
（1） 2-酮戊二酸+NADPH+NH L-谷氨酸+NADP+HO4++2
NADP的形成量與氨的量是化學(xué)計(jì)量的。它是NADPH消耗量，通過(guò)340nm處吸光度的降低來(lái)測(cè)量。+2
特異性、敏感性、線(xiàn)性和精密度：
該分析對(duì)氨有特異性。在試劑級(jí)硫酸銨的分析中，預(yù)期結(jié)果約為100%。
測(cè)定的最小區(qū)分吸光度為0.005吸光度單位。這相當(dāng)于最大樣品體積為2.00 mL時(shí)樣品溶液的濃度為0.018 mg/L。檢測(cè)限為0.071 mg/L，其來(lái)源于最大樣品體積為2.00 mL時(shí)吸光度差為0.020。
在每次測(cè)定0.2至7μg氨的范圍內(nèi)，測(cè)定呈線(xiàn)性（圖2，第11頁(yè)）。使用一種樣品溶液進(jìn)行兩次測(cè)定時(shí)，吸光度差可能為0.005至0.010。當(dāng)樣品體積為2.00 mL時(shí)，這相當(dāng)于約0.018至0.035 mg/L樣品溶液的氨濃度。如果在樣品制備過(guò)程中對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑒t結(jié)果乘以稀釋系數(shù)F。如果在樣品制備過(guò)程中對(duì)樣品進(jìn)行稱(chēng)重，例如10 g/L，則預(yù)計(jì)差值為0.02至0.05 g/100 g。
干擾：
如果在分析規(guī)定的時(shí)間內(nèi)（約3分鐘）完成了氨的轉(zhuǎn)化，一般可以得出沒(méi)有發(fā)生干擾的結(jié)論。但是，這可以通過(guò)在反應(yīng)完成后向反應(yīng)杯中添加氨（約4μg/0.1 mL）來(lái)進(jìn)一步檢查。應(yīng)觀(guān)察到吸光度顯著降低。
所分析樣品中的干擾物質(zhì)可通過(guò)包括內(nèi)標(biāo)物來(lái)識(shí)別。這一標(biāo)準(zhǔn)的定量回收率是可以預(yù)期的。樣品處理和提取過(guò)程中的損失通過(guò)進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，即在最初的提取步驟中向樣品中添加氨水。
在堿性緩沖溶液中，蛋白質(zhì)碎片可能緩慢釋放氨，導(dǎo)致緩慢的蠕變反應(yīng)。這不是這個(gè)藥盒的問(wèn)題，因?yàn)榉磻?yīng)完成得太快了。
果汁中的單寧能顯著抑制牛肉肝中的GlDH，這是一種用于氨水和尿素/氨水試劑盒的酶。然而，此試劑盒中使用的酶不受此限制（圖3，第12頁(yè)）。
安全性：
應(yīng)遵守適用于所有化學(xué)物質(zhì)的一般安全措施。
有關(guān)安全使用和處理本產(chǎn)品的更多信息，請(qǐng)參閱Megazyme網(wǎng)站提供的相關(guān)SDS。
工具箱：
可從Megazyme獲得適用于以手動(dòng)方式進(jìn)行96次分析（或以自動(dòng)分析儀方式進(jìn)行960次分析或以酶標(biāo)板方式進(jìn)行960次分析）的試劑盒。試劑盒包含完整的分析方法以及：
瓶子1：緩沖液（36 mL，pH 8.0）加2-酮戊二酸和疊氮化鈉（0.02%w/v）作為防腐劑。在4°C下穩(wěn)定>2年。
瓶子2:（x 2）納德夫。
在-10°C以下穩(wěn)定5年以上。
瓶子3：谷氨酸脫氫酶懸浮液（2.2 mL）。
在4°C下穩(wěn)定>2年。
瓶子4：氨標(biāo)準(zhǔn)溶液（5 mL，0.04 mg/mL）
0.02%（w/v）疊氮化鈉。
穩(wěn)定>2年；密封儲(chǔ)存在4°C。
試劑溶液的制備：
1. 使用提供的瓶子1的內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定>2年。
2. 在12毫升蒸餾水中溶解第2瓶的內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定4周或在-10°C以下穩(wěn)定2年以上（為避免重復(fù)的凍融循環(huán)，分為大小合適的小份并儲(chǔ)存在聚丙烯管中）。
3 & 4.使用提供的瓶子3和瓶子4的內(nèi)容物。將瓶子直立存放。使用前旋轉(zhuǎn)瓶子3以混合內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定>2年，穩(wěn)定>2年；在4°C下密封儲(chǔ)存。
注：注：氨標(biāo)準(zhǔn)溶液僅在對(duì)所用分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性有疑問(wèn)或懷疑樣品中的物質(zhì)引起抑制的情況下進(jìn)行分析。氨的濃度直接由NADPH的消光系數(shù)決定（第5頁(yè)）。
設(shè)備（推薦）：
1. 玻璃試管（圓底；16 x 100 mm）。
2. 一次性塑料試管（1厘米光路，3.0毫升）。
3. 微量移液器，例如Gilson移液器（100μL）。®
4. 容積式移液器，如Eppendorf Multipette®
- 與12.5 mL Combitip[分配0.5 mL等分NADPH緩沖液（溶液2）]。®
- 用25 mL Combitip（分配2.0 mL蒸餾水）。®
5. 分析天平。
6. 分光光度計(jì)設(shè)置為340nm。
7. 渦流混合器（如IKA Yellowline試管振動(dòng)篩TTS2）。®
8. 停止計(jì)時(shí)。
9. Whatman 1號(hào)（9厘米）濾紙。
A、 手動(dòng)分析程序：
逆風(fēng)閱讀（光路上沒(méi)有反應(yīng)杯）或靠水
*例如，用塑料楔子或用反應(yīng)杯蓋或薄膜密封反應(yīng)杯后輕輕翻轉(zhuǎn)。®
如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將吸收（樣品和空白）推回到懸浮液3的加入時(shí)間。
計(jì)算：
測(cè)定空白和樣品的吸光度差（A-A）。從樣品吸光度差中減去空白吸收差，從而獲得δA。12氨
ΔA的值通常應(yīng)至少為0.100吸光度單位，以獲得足夠準(zhǔn)確的結(jié)果。氨
氨的濃度可計(jì)算如下：
如果樣品在制備過(guò)程中被稀釋?zhuān)瑒t結(jié)果必須乘以稀釋系數(shù)F。
在分析為制備樣品而稱(chēng)重的固體和半固體樣品時(shí)，含量（g/100 g）根據(jù)稱(chēng)重量計(jì)算如下：
氨含量
=cammonia[g/L樣品溶液]x 100[g/100 g]
重量[g/L樣品溶液]樣品
注：這些計(jì)算可以通過(guò)使用Megazyme Mega CalcTM來(lái)簡(jiǎn)化，可從Megazyme網(wǎng)站上的產(chǎn)品下載(www.megazyme.com).
B、 自動(dòng)分析儀分析程序：
筆記：
1. 氨的自動(dòng)分析儀分析程序可使用單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或全校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行。
2. 對(duì)于用于氨測(cè)定的每批樣品，必須同時(shí)使用同一批試劑執(zhí)行單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)曲線(xiàn)。
試劑制備如下：
R1的制備：
R2的制備：
示例方法：
C、 微孔板分析程序：
筆記：
1. 氨的微孔板分析程序可以使用單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或全校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行。
2. 對(duì)于用于氨測(cè)定的每批樣品，必須同時(shí)使用同一批試劑執(zhí)行單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)曲線(xiàn)。
*例如，使用微孔板搖床、微孔板讀卡器上的搖床功能或重復(fù)抽吸（例如，使用容量為50-100μL的移液器）。
**如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將樣品吸光度推回到懸浮液3的加入時(shí)間。
計(jì)算（微孔板分析程序）：g/L=ΔA x g/L標(biāo)準(zhǔn)x F樣品
ΔA標(biāo)準(zhǔn)
如果樣品在制備過(guò)程中被稀釋?zhuān)瑒t結(jié)果必須乘以稀釋系數(shù)F。
圖1。顯示K-AMIAR線(xiàn)性的校準(zhǔn)曲線(xiàn)。用于產(chǎn)生該校準(zhǔn)曲線(xiàn)的反應(yīng)在37℃下使用10 mm路徑長(zhǎng)度的反應(yīng)杯進(jìn)行5 min。
樣品制備（手工格式，A）：
1樣品稀釋。
反應(yīng)杯（即0.1 mL待分析樣品）中的氨含量應(yīng)在0.2和7μg之間。因此，樣品溶液必須充分稀釋?zhuān)援a(chǎn)生0.01和0.07 g/L之間的氨濃度。
稀釋表
如果ΔA的值太低（例如<0.100），則稱(chēng)取更多樣品或稀釋得不太強(qiáng)烈�；蛘�，通過(guò)移液管將樣品體積增加至2.00 mL，確保反應(yīng)中樣品和蒸餾水成分的總和為2.10 mL，并使用方程式中的新樣品體積。
2樣品澄清：
Carrez試劑不能用于脫蛋白，因?yàn)樗鼈兊氖褂脤?dǎo)致回收率顯著降低。使用高氯酸或三氯乙酸作為替代品（見(jiàn)具體示例）。
三。一般考慮。
（a） 液體樣品：透明、淺色和近似中性的液體樣品可直接用于分析。
（b） 酸性樣品：如果使用>0.1 mL的未稀釋酸性樣品（如葡萄酒或果汁），則可能需要使用2 M NaOH將溶液的pH值增加至約8.0。
（c） 二氧化碳：含有大量二氧化碳的樣品應(yīng)通過(guò)使用2 M NaOH將pH值增加至約8.0并輕輕攪拌或使用玻璃棒攪拌來(lái)脫氣。
（d） 彩色樣品：如果需要，對(duì)于彩色樣品，應(yīng)進(jìn)行空白樣品，即不含GlDH的樣品。
（e） 顏色強(qiáng)烈的樣品：如果使用未稀釋、顏色強(qiáng)烈的樣品，應(yīng)添加0.2 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）/10 mL樣品進(jìn)行處理。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。
（f） 固體樣品：在蒸餾水中均勻化或粉碎固體樣品，必要時(shí)過(guò)濾。
（g） 含脂肪樣品：在高于脂肪熔點(diǎn)的溫度下用熱水提取此類(lèi)樣品，例如在60°C的100 mL容量瓶中。調(diào)整至室溫，并用蒸餾水填充容量瓶中至刻度。在冰上或冰箱中保存15-30分鐘，然后過(guò)濾。丟棄前幾毫升濾液，并使用透明上清液（可能有點(diǎn)乳白色）進(jìn)行分析。
（h） 含有蛋白質(zhì)的樣品：通過(guò)加入等量的1 M冰高氯酸并混合，使含有蛋白質(zhì)的樣品脫蛋白。以1500 g離心10分鐘，并用1 M KOH中和上清液。或者，使用如下樣品制備實(shí)例（c）中所述的三氯乙酸。
樣品制備示例：
（a） 葡萄汁/葡萄酒中氨的測(cè)定。一般來(lái)說(shuō)，白葡萄汁和紅葡萄汁/果醬和葡萄酒中的氨濃度可以在不進(jìn)行任何樣品處理的情況下進(jìn)行測(cè)定（過(guò)濾除外，必要時(shí)根據(jù)稀釋表進(jìn)行稀釋?zhuān)�。如果要分析體積大于25μL的紅酒，可能需要通過(guò)添加0.2 g PVPP/10 mL樣品去除部分顏色。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。通常，不需要稀釋?zhuān)?5-50μL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（b） 果汁（如橙汁）中氨的測(cè)定。
使用2 M NaOH將25 mL過(guò)濾樣品的pH值調(diào)節(jié)至約8.0。將溶液定量轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用蒸餾水調(diào)節(jié)至所需體積。如果溶液顏色很深，可能需要添加0.2 g PVPP/10 mL樣品以去除部分顏色。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。通常，不需要稀釋?zhuān)?.1 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（c） 牛奶中氨的測(cè)定。
在玻璃試管中，精確混合1毫升牛奶和3毫升牛奶
0.3M三氯乙酸。在室溫下培養(yǎng)5分鐘以確保蛋白質(zhì)完全沉淀，然后在室溫下離心3分鐘（2000 g）。傾析上清液，并使用pH測(cè)試條，用10 M KOH中和（高濃度KOH導(dǎo)致體積顯著增加）。過(guò)濾，直接用清清上清液進(jìn)行分析。一般情況下，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)枰畲?.0 mL的樣品體積。
（d） 烘烤產(chǎn)品中氨的測(cè)定。
準(zhǔn)確稱(chēng)取約10 g代表性材料，放入100 mL溶液中
杜蘭瓶。添加20 mL 1 M高氯酸并均化®
使用Ultra turrax或Polytron均質(zhì)機(jī)（或同等設(shè)備）2分鐘。定量轉(zhuǎn)移至40 mL玻璃燒杯中，并使用2 M KOH將pH調(diào)節(jié)至約8.0。定量轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用蒸餾水調(diào)至刻度（確保含脂層“在”刻度上，水層“在”刻度上）。在冰上儲(chǔ)存20分鐘以沉淀高氯酸鉀，并使脂肪分離。過(guò)濾，丟棄前3-5 mL，并使用澄清濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。®®
（e） 肉和肉制品中氨的測(cè)定。
準(zhǔn)確稱(chēng)取約5 g代表性材料放入100 mL Duran瓶中。添加20 mL 1 M高氯酸并使用Ultra turrax或Polytron均化器（或等效物）均化2分鐘。定量轉(zhuǎn)移至40 mL玻璃燒杯中，并使用2 M KOH將pH調(diào)節(jié)至約8.0。定量轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用蒸餾水調(diào)至刻度（確保含脂層“在”刻度上，水層“在”刻度上）。在冰上儲(chǔ)存20分鐘以沉淀高氯酸鉀，并使脂肪分離。過(guò)濾，丟棄前3-5 mL，并使用澄清濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。®®®
（f） 甘草制品中氨的測(cè)定。使用杵和研缽使約3g樣品均勻化，并準(zhǔn)確稱(chēng)取約1g代表性材料至100ml容量瓶中。加入60毫升蒸餾水，在70℃下孵育10分鐘，或直至完全溶解。使其平衡至室溫，并用蒸餾水填充至標(biāo)記處。過(guò)濾并使用略帶顏色的濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（g） 水中氨的測(cè)定（如游泳池水）。
水的氨濃度通常可以不經(jīng)任何樣品處理而測(cè)定。一般情況下，不需要稀釋?zhuān)枰?.0 mL的樣品體積。
氨是一種廣泛存在的天然化合物，通常由微生物蛋白質(zhì)分解代謝產(chǎn)生，因此可作為果汁、牛奶、奶酪、肉類(lèi)、海鮮和面包制品的質(zhì)量指標(biāo)。與其他一些試劑盒不同，這種試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是使用了谷氨酸脫氫酶，這種酶不受單寧的抑制，例如葡萄汁和葡萄酒。K-AMIAR可用于手動(dòng)測(cè)定氨（見(jiàn)第4頁(yè)“A”）、自動(dòng)分析儀格式（見(jiàn)第6頁(yè)“B”）或微孔板格式（見(jiàn)第7頁(yè)“C”）。在葡萄酒工業(yè)中，氨的測(cè)定是計(jì)算酵母有效氮（YAN）的重要環(huán)節(jié)。YAN包含三種高度可變的成分，游離銨離子、初級(jí)氨基氮（來(lái)自游離氨基酸）和L-精氨酸側(cè)鏈的貢獻(xiàn)。因此，為了最準(zhǔn)確地測(cè)定YAN，應(yīng)該對(duì)所有三種成分進(jìn)行定量，這可以使用Megazyme的L-精氨酸/尿素/氨試劑盒（K-LARGE）和NOPA試劑盒（K-PANOPA）。1
原則：
在谷氨酸脫氫酶（GlDH）和還原煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）存在下，氨（銨離子；NH）與2-酮戊二酸反應(yīng)生成L-谷氨酸和NADP（1）。4++
（GlDH公司）
（1） 2-酮戊二酸+NADPH+NH L-谷氨酸+NADP+HO4++2NADP的形成量與氨的量是化學(xué)計(jì)量的。它是NADPH消耗量，通過(guò)340nm處吸光度的降低來(lái)測(cè)量。+2
特異性、敏感性、線(xiàn)性和精密度：
該分析對(duì)氨有特異性。在試劑級(jí)硫酸銨的分析中，預(yù)期結(jié)果約為100%。
測(cè)定的最小區(qū)分吸光度為0.005吸光度單位。這相當(dāng)于最大樣品體積為2.00 mL時(shí)樣品溶液的濃度為0.018 mg/L。檢測(cè)限為0.071 mg/L，其來(lái)源于最大樣品體積為2.00 mL時(shí)吸光度差為0.020。
在每次測(cè)定0.2至7μg氨的范圍內(nèi)，測(cè)定呈線(xiàn)性（圖2，第11頁(yè)）。使用一種樣品溶液進(jìn)行兩次測(cè)定時(shí)，吸光度差可能為0.005至0.010。當(dāng)樣品體積為2.00 mL時(shí)，這相當(dāng)于約0.018至0.035 mg/L樣品溶液的氨濃度。如果在樣品制備過(guò)程中對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑒t結(jié)果乘以稀釋系數(shù)F。如果在樣品制備過(guò)程中對(duì)樣品進(jìn)行稱(chēng)重，例如10 g/L，則預(yù)計(jì)差值為0.02至0.05 g/100 g。
干擾：
如果在分析規(guī)定的時(shí)間內(nèi)（約3分鐘）完成了氨的轉(zhuǎn)化，一般可以得出沒(méi)有發(fā)生干擾的結(jié)論。但是，這可以通過(guò)在反應(yīng)完成后向反應(yīng)杯中添加氨（約4μg/0.1 mL）來(lái)進(jìn)一步檢查。應(yīng)觀(guān)察到吸光度顯著降低。
所分析樣品中的干擾物質(zhì)可通過(guò)包括內(nèi)標(biāo)物來(lái)識(shí)別。這一標(biāo)準(zhǔn)的定量回收率是可以預(yù)期的。樣品處理和提取過(guò)程中的損失通過(guò)進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，即在最初的提取步驟中向樣品中添加氨水。
在堿性緩沖溶液中，蛋白質(zhì)碎片可能緩慢釋放氨，導(dǎo)致緩慢的蠕變反應(yīng)。這不是這個(gè)藥盒的問(wèn)題，因?yàn)榉磻?yīng)完成得太快了。
果汁中的單寧能顯著抑制牛肉肝中的GlDH，這是一種用于氨水和尿素/氨水試劑盒的酶。然而，此試劑盒中使用的酶不受此限制（圖3，第12頁(yè)）。
安全性：
應(yīng)遵守適用于所有化學(xué)物質(zhì)的一般安全措施。
有關(guān)安全使用和處理本產(chǎn)品的更多信息，請(qǐng)參閱Megazyme網(wǎng)站提供的相關(guān)SDS。
工具箱：
可從Megazyme獲得適用于以手動(dòng)方式進(jìn)行96次分析（或以自動(dòng)分析儀方式進(jìn)行960次分析或以酶標(biāo)板方式進(jìn)行960次分析）的試劑盒。試劑盒包含完整的分析方法以及：
瓶子1：緩沖液（36 mL，pH 8.0）加2-酮戊二酸和疊氮化鈉（0.02%w/v）作為防腐劑。在4°C下穩(wěn)定>2年。
瓶子2:（x 2）納德夫。
在-10°C以下穩(wěn)定5年以上。
瓶子3：谷氨酸脫氫酶懸浮液（2.2 mL）。
在4°C下穩(wěn)定>2年。
瓶子4：氨標(biāo)準(zhǔn)溶液（5 mL，0.04 mg/mL）
0.02%（w/v）疊氮化鈉。
穩(wěn)定>2年；密封儲(chǔ)存在4°C。
試劑溶液的制備：
1. 使用提供的瓶子1的內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定>2年。
2. 在12毫升蒸餾水中溶解第2瓶的內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定4周或在-10°C以下穩(wěn)定2年以上（為避免重復(fù)的凍融循環(huán)，分為大小合適的小份并儲(chǔ)存在聚丙烯管中）。
3 & 4.使用提供的瓶子3和瓶子4的內(nèi)容物。將瓶子直立存放。使用前旋轉(zhuǎn)瓶子3以混合內(nèi)容物。在4°C下穩(wěn)定>2年，穩(wěn)定>2年；在4°C下密封儲(chǔ)存。
注：注：氨標(biāo)準(zhǔn)溶液僅在對(duì)所用分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性有疑問(wèn)或懷疑樣品中的物質(zhì)引起抑制的情況下進(jìn)行分析。氨的濃度直接由NADPH的消光系數(shù)決定（第5頁(yè)）。
設(shè)備（推薦）：
1. 玻璃試管（圓底；16 x 100 mm）。
2. 一次性塑料試管（1厘米光路，3.0毫升）。
3. 微量移液器，例如Gilson移液器（100μL）。®
4. 容積式移液器，如Eppendorf Multipette®
- 與12.5 mL Combitip[分配0.5 mL等分NADPH緩沖液（溶液2）]。®
- 用25 mL Combitip（分配2.0 mL蒸餾水）。®
5. 分析天平。
6. 分光光度計(jì)設(shè)置為340nm。
7. 渦流混合器（如IKA Yellowline試管振動(dòng)篩TTS2）。®
8. 停止計(jì)時(shí)。
9. Whatman 1號(hào)（9厘米）濾紙。
A、 手動(dòng)分析程序：
| 波長(zhǎng)： | 340牛米 |
| 反應(yīng)杯： | 1 cm光路（玻璃或塑料） |
| 溫度： | ~25攝氏度 |
| 最終體積： | 2.62毫升 |
| 樣品溶液： | 每比色杯0.2-7.0μg氨 |
| （0.1-2.0 mL樣品體積） |
| 用移液管移到試管中 | 空白 | 樣品 |
| 蒸餾水（約25°C） 樣品 溶液1（緩沖液）溶液2（NADPH） |
2.10毫升 - 0.30毫升 0.20毫升 |
2.00毫升0.10毫升0.30毫升 0.20毫升 |
| 混合*，大約2分鐘后讀取溶液（A）的吸光度，并通過(guò)添加以下物質(zhì)開(kāi)始反應(yīng)：1 | ||
| 懸架3（GlDH） | 0.02毫升 | 0.02毫升 |
| 混合*并在反應(yīng)結(jié)束時(shí)（約5分鐘）讀取溶液（A）的吸光度。如果反應(yīng)在5分鐘后仍未停止，則繼續(xù)每隔1分鐘讀取吸光度，直到吸光度保持不變或持續(xù)增加2 1分鐘**。 |
||
如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將吸收（樣品和空白）推回到懸浮液3的加入時(shí)間。
計(jì)算：
測(cè)定空白和樣品的吸光度差（A-A）。從樣品吸光度差中減去空白吸收差，從而獲得δA。12氨
ΔA的值通常應(yīng)至少為0.100吸光度單位，以獲得足夠準(zhǔn)確的結(jié)果。氨
氨的濃度可計(jì)算如下：
| c=V×MW×ΔA氨 εx d x v 哪里： V=最終體積【mL】 MW=氨的分子量[g/mol]ε=340nm處NADPH的消光系數(shù) =6300[l x mol x cm]d=光路[cm]v=樣品體積[mL]-1-1 氨氣如下： |
[克/升] |
c=2.62 x 17.03 xΔA氨 6300 x 1.0 x 0.10毫米 =0.07082 xΔA氨 |
[克/升] [克/升] |
在分析為制備樣品而稱(chēng)重的固體和半固體樣品時(shí)，含量（g/100 g）根據(jù)稱(chēng)重量計(jì)算如下：
氨含量
=cammonia[g/L樣品溶液]x 100[g/100 g]重量[g/L樣品溶液]樣品
注：這些計(jì)算可以通過(guò)使用Megazyme Mega CalcTM來(lái)簡(jiǎn)化，可從Megazyme網(wǎng)站上的產(chǎn)品下載(www.megazyme.com).
B、 自動(dòng)分析儀分析程序：
筆記：
1. 氨的自動(dòng)分析儀分析程序可使用單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或全校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行。
2. 對(duì)于用于氨測(cè)定的每批樣品，必須同時(shí)使用同一批試劑執(zhí)行單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)曲線(xiàn)。
試劑制備如下：
R1的制備：
| 組成部分 | 體積 |
| 蒸餾水溶液1（緩沖）瓶2（NADPH） | 60毫升 12毫升 8毫升（向瓶子2中加入12毫升HO后）2 |
| 總體積 | 80毫升 |
| 組成部分 | 體積 |
| 蒸餾水溶液1（緩沖液）懸浮液3（GlDH） | 6.8毫升0.5毫升 0.7毫升 |
| 總體積 | 8.0毫升 |
| R1級(jí)： | 0.200毫升 |
| 樣品： | ~0.01毫升 |
| R2級(jí)： | 0.025毫升 |
| 反應(yīng)時(shí)間： | 25°C或37°C下約5分鐘 |
| 波長(zhǎng)： | 340牛米 |
| 配制試劑穩(wěn)定性： | >冷藏7天 |
| 計(jì)算： | 終結(jié)點(diǎn) |
| 反應(yīng)方向： | 減少 |
| 線(xiàn)性度： | 使用高達(dá)62 mg/L的氨 0.01 mL樣品體積 |
筆記：
1. 氨的微孔板分析程序可以使用單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或全校準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行。
2. 對(duì)于用于氨測(cè)定的每批樣品，必須同時(shí)使用同一批試劑執(zhí)行單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)曲線(xiàn)。
| 波長(zhǎng)： | 340牛米 | ||||
| 微孔板： | 96井（如透明平底、玻璃或塑料） | ||||
| 溫度： | ~25攝氏度 | ||||
| 最終體積： | 0.262毫升 | ||||
| 線(xiàn)性度： | 每口井0.1-0.7μg氨 | ||||
| （0.01-0.2 mL樣品體積） | |||||
| 用移液管注入井內(nèi) | 空白 | 樣品 | 標(biāo)準(zhǔn) | ||
| 蒸餾水樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液1（緩沖液）溶液2（NADPH） | 0.210毫升 - - 0.030毫升 0.020毫升 |
0.200毫升 0.010毫升 - 0.030毫升 0.020毫升 |
0.200毫升 - 0.010毫升0.030毫升 0.020毫升 |
||
| 混合*，大約2分鐘后讀取溶液（A）的吸光度，并通過(guò)添加以下物質(zhì)開(kāi)始反應(yīng)：1 | |||||
| 懸架3（GlDH） | 0.002毫升 | 0.002毫升 | 0.002毫升 | ||
| 混合*并在反應(yīng)結(jié)束時(shí)（約5分鐘）讀取溶液（A）的吸光度。如果反應(yīng)在5分鐘后仍未停止，則繼續(xù)每隔1分鐘讀取吸光度，直到吸光度在1分鐘內(nèi)持續(xù)增加**。2 | |||||
**如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將樣品吸光度推回到懸浮液3的加入時(shí)間。
計(jì)算（微孔板分析程序）：g/L=ΔA x g/L標(biāo)準(zhǔn)x F樣品
ΔA標(biāo)準(zhǔn)
如果樣品在制備過(guò)程中被稀釋?zhuān)瑒t結(jié)果必須乘以稀釋系數(shù)F。
圖1。顯示K-AMIAR線(xiàn)性的校準(zhǔn)曲線(xiàn)。用于產(chǎn)生該校準(zhǔn)曲線(xiàn)的反應(yīng)在37℃下使用10 mm路徑長(zhǎng)度的反應(yīng)杯進(jìn)行5 min。
樣品制備（手工格式，A）：
1樣品稀釋。
反應(yīng)杯（即0.1 mL待分析樣品）中的氨含量應(yīng)在0.2和7μg之間。因此，樣品溶液必須充分稀釋?zhuān)援a(chǎn)生0.01和0.07 g/L之間的氨濃度。
稀釋表
| 估計(jì)濃度 | 稀釋 | 稀釋 |
| 氨（g/L） | 有水嗎 | 系數(shù)（F） |
| < 0.07 | 無(wú)需稀釋 | 1 |
| 0.07-0.7 | 1 + 9 | 10 |
| 0.7-7.0 | 1 + 99 | 100 |
2樣品澄清：
Carrez試劑不能用于脫蛋白，因?yàn)樗鼈兊氖褂脤?dǎo)致回收率顯著降低。使用高氯酸或三氯乙酸作為替代品（見(jiàn)具體示例）。
三。一般考慮。
（a） 液體樣品：透明、淺色和近似中性的液體樣品可直接用于分析。
（b） 酸性樣品：如果使用>0.1 mL的未稀釋酸性樣品（如葡萄酒或果汁），則可能需要使用2 M NaOH將溶液的pH值增加至約8.0。
（c） 二氧化碳：含有大量二氧化碳的樣品應(yīng)通過(guò)使用2 M NaOH將pH值增加至約8.0并輕輕攪拌或使用玻璃棒攪拌來(lái)脫氣。
（d） 彩色樣品：如果需要，對(duì)于彩色樣品，應(yīng)進(jìn)行空白樣品，即不含GlDH的樣品。
（e） 顏色強(qiáng)烈的樣品：如果使用未稀釋、顏色強(qiáng)烈的樣品，應(yīng)添加0.2 g聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）/10 mL樣品進(jìn)行處理。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。
（f） 固體樣品：在蒸餾水中均勻化或粉碎固體樣品，必要時(shí)過(guò)濾。
（g） 含脂肪樣品：在高于脂肪熔點(diǎn)的溫度下用熱水提取此類(lèi)樣品，例如在60°C的100 mL容量瓶中。調(diào)整至室溫，并用蒸餾水填充容量瓶中至刻度。在冰上或冰箱中保存15-30分鐘，然后過(guò)濾。丟棄前幾毫升濾液，并使用透明上清液（可能有點(diǎn)乳白色）進(jìn)行分析。
（h） 含有蛋白質(zhì)的樣品：通過(guò)加入等量的1 M冰高氯酸并混合，使含有蛋白質(zhì)的樣品脫蛋白。以1500 g離心10分鐘，并用1 M KOH中和上清液。或者，使用如下樣品制備實(shí)例（c）中所述的三氯乙酸。
樣品制備示例：
（a） 葡萄汁/葡萄酒中氨的測(cè)定。一般來(lái)說(shuō)，白葡萄汁和紅葡萄汁/果醬和葡萄酒中的氨濃度可以在不進(jìn)行任何樣品處理的情況下進(jìn)行測(cè)定（過(guò)濾除外，必要時(shí)根據(jù)稀釋表進(jìn)行稀釋?zhuān)�。如果要分析體積大于25μL的紅酒，可能需要通過(guò)添加0.2 g PVPP/10 mL樣品去除部分顏色。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。通常，不需要稀釋?zhuān)?5-50μL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（b） 果汁（如橙汁）中氨的測(cè)定。
使用2 M NaOH將25 mL過(guò)濾樣品的pH值調(diào)節(jié)至約8.0。將溶液定量轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用蒸餾水調(diào)節(jié)至所需體積。如果溶液顏色很深，可能需要添加0.2 g PVPP/10 mL樣品以去除部分顏色。用力搖晃試管5分鐘，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。通常，不需要稀釋?zhuān)?.1 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（c） 牛奶中氨的測(cè)定。
在玻璃試管中，精確混合1毫升牛奶和3毫升牛奶
0.3M三氯乙酸。在室溫下培養(yǎng)5分鐘以確保蛋白質(zhì)完全沉淀，然后在室溫下離心3分鐘（2000 g）。傾析上清液，并使用pH測(cè)試條，用10 M KOH中和（高濃度KOH導(dǎo)致體積顯著增加）。過(guò)濾，直接用清清上清液進(jìn)行分析。一般情況下，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)枰畲?.0 mL的樣品體積。
（d） 烘烤產(chǎn)品中氨的測(cè)定。
準(zhǔn)確稱(chēng)取約10 g代表性材料，放入100 mL溶液中
杜蘭瓶。添加20 mL 1 M高氯酸并均化®
使用Ultra turrax或Polytron均質(zhì)機(jī)（或同等設(shè)備）2分鐘。定量轉(zhuǎn)移至40 mL玻璃燒杯中，并使用2 M KOH將pH調(diào)節(jié)至約8.0。定量轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用蒸餾水調(diào)至刻度（確保含脂層“在”刻度上，水層“在”刻度上）。在冰上儲(chǔ)存20分鐘以沉淀高氯酸鉀，并使脂肪分離。過(guò)濾，丟棄前3-5 mL，并使用澄清濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。®®
（e） 肉和肉制品中氨的測(cè)定。
準(zhǔn)確稱(chēng)取約5 g代表性材料放入100 mL Duran瓶中。添加20 mL 1 M高氯酸并使用Ultra turrax或Polytron均化器（或等效物）均化2分鐘。定量轉(zhuǎn)移至40 mL玻璃燒杯中，并使用2 M KOH將pH調(diào)節(jié)至約8.0。定量轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用蒸餾水調(diào)至刻度（確保含脂層“在”刻度上，水層“在”刻度上）。在冰上儲(chǔ)存20分鐘以沉淀高氯酸鉀，并使脂肪分離。過(guò)濾，丟棄前3-5 mL，并使用澄清濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。®®®
（f） 甘草制品中氨的測(cè)定。使用杵和研缽使約3g樣品均勻化，并準(zhǔn)確稱(chēng)取約1g代表性材料至100ml容量瓶中。加入60毫升蒸餾水，在70℃下孵育10分鐘，或直至完全溶解。使其平衡至室溫，并用蒸餾水填充至標(biāo)記處。過(guò)濾并使用略帶顏色的濾液進(jìn)行分析。通常，不需要進(jìn)一步稀釋?zhuān)?.5 mL的樣品體積是令人滿(mǎn)意的。
（g） 水中氨的測(cè)定（如游泳池水）。
水的氨濃度通常可以不經(jīng)任何樣品處理而測(cè)定。一般情況下，不需要稀釋?zhuān)枰?.0 mL的樣品體積。
標(biāo)簽：
氨測(cè)定試劑盒（快速）
- 吐溫-20技的基本特性及多領(lǐng)域應(yīng)用詳解
- 嬰幼兒零輔食代工致過(guò)敏原標(biāo)注混亂風(fēng)險(xiǎn)高的檢測(cè)及預(yù)防
- 銅螯合劑Ammonium tetrathiomolybdate(TTM)抑制銅死亡機(jī)制及研究應(yīng)用
- Wortmannin(渥曼青霉素)作為PI3K抑制劑在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用
- Silmitasertib(CX-4945)作為CK2抑制劑在細(xì)胞代謝調(diào)控中的應(yīng)用研究
- TMB顯色液的原理、應(yīng)用與配置優(yōu)化方法
- KAT2A棕櫚�；揎椩谌橄侔┓无D(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵作用機(jī)制
- TBST緩沖液的原理、應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)技巧全解析
- 西美杰與Pfanstiehl攜手亮相2026 BIO CHINA
- 陶術(shù)生物直播預(yù)告：從“免疫平衡”到“免疫震蕩”
- 普瑞邦推出新品磺胺類(lèi)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒
- TargetMol開(kāi)學(xué)季，滿(mǎn)額送黃金等多重福利活動(dòng)來(lái)襲
- 西美杰攜Pfanstiehl輔料與您相約2026 BIO CHINA
- MCE開(kāi)學(xué)季：購(gòu)重組蛋白抗體等享好禮，另有集卡兌換
- MCE主題直播預(yù)告：化合物庫(kù)的選擇及使用
- MCE新學(xué)期多線(xiàn)試劑產(chǎn)品享折扣,另有元宵節(jié)免費(fèi)電影票
Copyright(C) 1998-2026 生物器材網(wǎng) 電話(huà)：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com