Gilteritinib吉列替尼-MCE

吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 是一種有效的 ATP 競(jìng)爭(zhēng)性的 FLT3/AXL 抑制劑，IC50 分別為 0.29 nM/0.73 nM。

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生物活性

體外研究

在測(cè)試的 78 種酪氨酸激酶中，吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 在 1 nM 時(shí)抑制 FLT3、白細(xì)胞酪氨酸激酶 （LTK）、間變性淋巴瘤激酶 （ALK） 和 AXL 激酶超過 50%，IC50 FLT3 的值為 0.29 nM，比 c-KIT 的效力高約 800 倍 吉列替尼Gilteritinib 在 1 nM（FLT3、LTK、ALK 和 AXL）或 5 nM（TRKA、ROS、RET 和 MER）濃度下將 78 種測(cè)試激酶中的 8 種活性抑制超過 50%。集成電路50FLT3 的 s 為 0.29 nM，AXL 的 s 為 0.73 nM。吉列替尼Gilteritinib 在 IC 上抑制 FLT350這比抑制 c-KIT 所需的濃度 （230 nM） 強(qiáng)大約 800 倍。對(duì)內(nèi)源性表達(dá) FLT3-ITD 的 MV4-11 和 MOLM-13 細(xì)胞評(píng)估 吉列替尼Gilteritinib 的抗增殖活性。治療 5 天后，吉列替尼Gilteritinib 以平均 IC 抑制 MV4-11 和 MOLM-13 細(xì)胞的生長(zhǎng)50s 分別為 0.92 nM （95% CI: 0.23-3.6 nM） 和 2.9 nM （95% CI: 1.4-5.8 nM）。MV4-11 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制伴隨著 FLT3 磷酸化的抑制。相對(duì)于載體對(duì)照細(xì)胞，磷酸化 FLT3 水平在用 0.1 nM、1 nM 和 10 nM 吉列替尼Gilteritinib 處理 2 小時(shí)后分別為 57%、8% 和 1%。此外，低至 0.1 nM 或 1 nM 的劑量會(huì)抑制磷酸化的 ERK、STAT5 和 AKT，所有這些都是 FLT3 激活的下游靶點(diǎn)。為了研究 吉列替尼Gilteritinib 對(duì) AXL 抑制的影響，用 吉列替尼Gilteritinib 處理表達(dá)外源性 AXL 的 MV4-11 細(xì)胞。在 1 nM、10 nM 和 100 nM 濃度下持續(xù) 4 小時(shí)，吉列替尼Gilteritinib 治療使磷酸化 AXL 水平分別降低 38%、29% 和 22%

MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

體內(nèi)研究

在 MV4-11 異種移植小鼠中，吉列替尼Gilteritinib （ASP2215） 在腫瘤中的濃度比口服 吉列替尼Gilteritinib 10 mg/kg 4 天的血漿濃度高 20 倍以上。吉列替尼Gilteritinib 治療 28 天導(dǎo)致 MV4-11 腫瘤生長(zhǎng)的劑量依賴性抑制，并在超過 6 mg/kg 時(shí)誘導(dǎo)完全腫瘤消退。此外，吉列替尼Gilteritinib 降低了骨髓中的腫瘤負(fù)荷并延長(zhǎng)了靜脈移植 MV4-11 細(xì)胞的小鼠的存活率

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實(shí)驗(yàn)參考方法

激酶檢測(cè)

吉列替尼Gilteritinib 的激酶抑制活性針對(duì)一組 78 種測(cè)試激酶進(jìn)行測(cè)試，使用的 ATP 濃度大約等于 K米TK-ELISA 或芯片外遷移率變化測(cè)定中每種激酶的值。最初，測(cè)試了兩種濃度的 吉列替尼Gilteritinib（1 nM 和 5 nM）以評(píng)估每種化合物對(duì) TK 活性的抑制作用。然后使用一定劑量范圍的 吉列替尼Gilteritinib 進(jìn)行進(jìn)一步研究以確定 IC501 nM 吉列替尼Gilteritinib 以及 c-KIT 抑制活性 > 50% 的激酶值。TK-ELISA 和 MSA 檢測(cè)用于進(jìn)行 IC50FLT3、LTK、AXL 和 c-KIT 的研究；進(jìn)行 HTRF KinEASE-TK 檢測(cè)以評(píng)估 IC50 棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白樣 4-ALK （EML4-ALK） 的價(jià)值[2].

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細(xì)胞檢測(cè)

使用 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 評(píng)估 吉列替尼Gilteritinib 對(duì) MV4-11 和 MOLM-13 細(xì)胞的影響。進(jìn)行后續(xù)研究以檢查 吉列替尼Gilteritinib 和 Quizartinib 對(duì)表達(dá) FLT3-ITD、FLT3-D835Y、FLT3-ITD-D835Y、FLT3-ITD-F691 L 或 FLT3-ITD-F691I 的 Ba/F3 細(xì)胞的影響。MV4-11 和 MOLM-13 細(xì)胞用 DMSO 或增加濃度的吉列替尼Gilteritinib（0.01、0.1、1、10 和 100 nM）處理 5 天，并使用 CellTiter-Glo 測(cè)量細(xì)胞活力[2].

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動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

老鼠

在移植了 MV4-11 AML 細(xì)胞的裸鼠中評(píng)估了抗腫瘤活性。還研究了異種移植小鼠的藥代動(dòng)力學(xué)。MV4-11異種移植小鼠用處理吉列替尼Gilteritinib的口服給藥以10mg / kg的4天。吉列替尼Gilteritinib 治療 28 天導(dǎo)致 MV4-11 腫瘤生長(zhǎng)的劑量依賴性抑制，并在超過 6 mg/kg 時(shí)誘導(dǎo)完全腫瘤消退

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