維奈妥拉Venetoclax抑制劑

　　Venetoclax (ABT-199; GDC-0199) 是一種高效，有選擇性和口服有效的 Bcl-2 抑制劑，Ki 小于0.01 nM。Venetoclax 可以誘導(dǎo)自噬 (autophagy) 作用。

 

 

 

　　體外研究

 

　　Venetoclax (ABT-199) 有效殺死 FL5.12-BCL-2 細(xì)胞 (EC50=4 nM)，Venetoclax (ABT-199) 對(duì) FL5.12-表現(xiàn)出更弱的活性 BCL-XL 細(xì)胞 (EC50=261 nM)。ABT-199 在細(xì)胞哺乳動(dòng)物雙雜交試驗(yàn)中也表現(xiàn)出選擇性，它會(huì)破壞 BCL-2-BIM 復(fù)合物 (EC50=3 nM)，但對(duì) BCL-XL 的效果要差得多-BCL-XS (EC50=2.2 μM) 或 MCL-1-NOXA 復(fù)合物。

 

　　體內(nèi)研究

 

　　在源自 RS4;11 細(xì)胞 (ALL) 的異種移植物模型中，單次口服劑量為 12.5 mg/kg 后，Venetoclax (ABT-199) 導(dǎo)致最大腫瘤生長抑制 (TGImax=47%) (P<0.001) 和腫瘤生長延遲 (TGD=26%) (P<0.05)。

 

　　用 Venetoclax (ABT-199) 100 mg/kg 處理 4 天已建立的異種移植 (T-ALL 細(xì)胞系 LOUCY 的小鼠異種移植模型) 腫瘤可顯著降低白血病負(fù)擔(dān)。

 

 

　　細(xì)胞試驗(yàn)

 

　　RS4;11個(gè)細(xì)胞以每孔50,000個(gè)的濃度在96孔板上接種，用從1 μM開始到0.00005 μM結(jié)束的半對(duì)數(shù)步稀釋的化合物處理。所有其他白血病和淋巴瘤細(xì)胞系以每孔15,000-20,000個(gè)細(xì)胞的速度在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中播種，并與Venetoclax或Navitoclax孵育48小時(shí)。使用cell TiterGlo試劑檢測(cè)對(duì)增殖的影響。EC50值由濃度-響應(yīng)數(shù)據(jù)的非線性回歸分析確定。對(duì)小鼠FL5.12-BCL-2和FL5.12-BCL-XL細(xì)胞進(jìn)行增殖和評(píng)價(jià)。將Bak-/- Bax-/-雙敲除小鼠胚胎成纖維細(xì)胞以每孔5000個(gè)細(xì)胞的速度接種于添加10%胎牛血清的DMEM微滴板中。Venetoclax (ABT-199)在相同的培養(yǎng)基中加入半對(duì)數(shù)稀釋，從5 μM開始。然后將細(xì)胞在37℃(5% CO2)下孵育48 h，使用Cell TiterGlo試劑檢測(cè)對(duì)增殖的影響。

 

　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

　　老鼠

 

　　非肥胖糖尿病/嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷γ (NSG)小鼠在6周齡時(shí)通過尾靜脈注射150?L含有5×106熒光素酶標(biāo)記的LOUCY細(xì)胞的磷酸鹽緩沖鹽水。在常規(guī)時(shí)間點(diǎn)，使用IVIS Lumina II成像系統(tǒng)測(cè)量生物發(fā)光。6周時(shí)，移植細(xì)胞，將小鼠隨機(jī)分為2組(兩組雌雄各占同等數(shù)量)，第0天開始治療。小鼠以100 mg/kg體重Venetoclax (ABT-199)或載藥灌胃，連續(xù)4 d。在第0、2和4天測(cè)量生物發(fā)光。