瑞孚迪發(fā)布新品HTRF Cellular Gαi GTP Binding kit
新品發(fā)布 | HTRF Cellular Gαi GTP Binding kit——告別膜制備，直擊GPCR信號(hào)源頭
G蛋白偶聯(lián)受體（GPCRs）是最大的藥物靶點(diǎn)家族，約34%的上市藥物通過調(diào)控GPCRs發(fā)揮作用。在GPCR信號(hào)通路中，Gαi蛋白作為抑制性G蛋白亞家族的核心成員，調(diào)控cAMP水平、離子通道及多種下游效應(yīng)，與疼痛管理、神經(jīng)退行性疾病、代謝紊亂及腫瘤免疫密切相關(guān)。
GPCR激活后，Gα亞基發(fā)生GDP/GTP核苷酸交換，這是信號(hào)傳導(dǎo)的最初生化事件。然而，傳統(tǒng)GTPγS結(jié)合實(shí)驗(yàn)需繁瑣的細(xì)胞膜制備，且常需構(gòu)建專用過表達(dá)細(xì)胞系，不僅耗時(shí)費(fèi)力，更導(dǎo)致上下游實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)難以橫向比較。
如何跳過膜制備，
直接用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)成的細(xì)胞系完成Gαi活化檢測(cè)？
我們近日推出的新品給出了答案：
實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/strong>
檢測(cè)流程
該實(shí)驗(yàn)基于HTRF技術(shù)，利用現(xiàn)成的活細(xì)胞直接種板培養(yǎng)，貼壁24小時(shí)后進(jìn)行透化處理，依次加入MgCl₂、待測(cè)化合物及Eu標(biāo)記GTP與d2標(biāo)記抗體的檢測(cè)混合液，室溫孵育4小時(shí)即可用HTRF讀板儀檢測(cè)，通過665/620nm熒光比值定量GPCR介導(dǎo)的Gi蛋白活化水平，全程一塊板完成，告別傳統(tǒng)膜制備的繁瑣步驟。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
- 細(xì)胞膜經(jīng)溫和透化處理，允許熒光GTP類似物自由進(jìn)入胞內(nèi)
- 保留GPCR-G蛋白復(fù)合物的天然構(gòu)象與相互作用
- 無需膜制備，在完整細(xì)胞骨架環(huán)境中檢測(cè)活化過程
- 完美兼容：內(nèi)源表達(dá)細(xì)胞系、HEK293過表達(dá)細(xì)胞系（包括Valiscreen®和Tag-lite®細(xì)胞系）及CHO-K1過表達(dá)細(xì)胞系
- 檢測(cè)窗口優(yōu)于傳統(tǒng)GTPγS結(jié)合實(shí)驗(yàn)
數(shù)據(jù)表現(xiàn)
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