六種蛋白檢測方法的原理、特點及適用樣本類型等介紹

為什么必須“多因子”？
😔傳統(tǒng) ELISA：1 孔 1 指標，耗樣 50–100 µL，96孔板做10個指標 → 樣本直接見底！
😃多因子檢測：1 孔 10–96 指標，耗樣 ≤50 µL，數據兩小時內到手，縱向隊列研究“真香”！
蛋白檢測方法怎么選？6大平臺一次看懂，省錢、省時、省樣本！

一、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA是基礎研究和臨床中對單一分析物進行定量分析的重要技術。目前商用的細胞因子Elisa試劑盒大多采用雙抗體夾心法，能夠高特異性檢測復雜樣品中的分析物，可廣泛用于多個物種和靶標。

特點：
（1）特異性高、靈敏度高、操作簡單方便、酶標儀、成本相對較低。
（2）一次實驗僅能檢測一個靶標，若需在同一樣品中檢測多個靶標。
（3）操作多個Elisa較為復雜，時間花費長，且需要的樣本量較大，后面提到的多指標分析技術可克服這些問題。

檢測儀器平臺：酶標儀
反應容器：96或384孔板
可檢測種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類、豬、狗、牛、羊等多個種屬
可檢測樣本類型：血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清等，不同的試劑盒適配的樣本類型不同。
所需樣本體積：50-100 µL
單次實驗可檢測指標數：1
靈敏度：pg/ml
線性范圍：2-3 logs，常規(guī)ELISA線性范圍在10pg/ml-1000pg/ml，超敏試劑盒則為0.5-10pg/ml，不同試劑盒線性范圍不同。

二、Luminex（液相懸浮芯片）
原理：
通過使用兩種不同的染料不同比例，產生多達100種不同顏色的微球。每種顏色的微球都具有獨特的編碼，并且只固定包被一種抗體，實現了編碼與靶標的一一對應。將多種不同編碼的微球混合在一起，放入同一個孔中。加入樣本和檢測抗體后，即可在一個樣本中同時檢測多種蛋白質，從而實現高通量檢測。

特點：
（1）節(jié)省樣本體積，不管檢測指標數量有多少，每例樣本都僅需50 uL。
（2）指標‌高通量‌，單次檢測可實現‌96個指標的檢測‌‌。
（3）靈敏度高‌，數據重復性高‌。
（4）指標靈活組合‌，個性化定制，支持炎癥因子、趨化因子、血管類多類型指標定制。滿足篩選驗證應用多領域研究‌。

樣本種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類、犬、豬、馬、牛、雞、羊、貓
可檢測樣本類型：細胞上清、血清、血漿、乳汁、尿液、組織裂解液、唾液、房水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液等多種樣本
所需樣本體積：25-50μL
靈敏度：pg/ml
線性范圍：3.5- 5.5 logs

三、MSD（超敏電化學發(fā)光技術）
原理
96孔板底部集成碳素電極，加入樣本后，目標蛋白被捕獲，使用Sulfo-tagTM標記物，形成“電極抗體抗原抗體SULFOTAG”夾心。通電后，電化學作用激發(fā)Sulf-tagTM標記物發(fā)出強光。由于其獨特的電化學發(fā)光原理，可將許多非特異信號予以排除，受樣本性質的影響更小，對于各類生物學樣本的兼容度高。

特點：
（1）節(jié)省樣本，10-50ul以內完成10指標。
（2）高靈敏、寬線性，數據重復性高，極適合低豐度生物標志物（如神經絲蛋白、tau）。
（3）指標靈活組合‌，可做開發(fā)型實驗。
（4）MSD已成為Aβ38、40、42等多因子檢測的金標準，另有α-Synuclein、APP、NFL、NFH、Tau、VEGF-A、GFAP等在內的多種神經相關指標的檢測產品。  

檢測種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類
可檢測樣本類型：細胞上清、血清、血漿、乳汁、尿液、組織裂解液、唾液、房水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液等多種樣本
所需樣本體積：10-50μL
靈敏度：可達fg/ml
線性范圍：3–6 logs，線性范圍更寬

四、Antibody Array（抗體芯片/固相芯片）
原理
抗體芯片技術利用特異性抗體，將目標蛋白從復雜的生物樣本中捕獲并固定在芯片上。通過洗脫非特異性結合的蛋白，對目標蛋白特異性檢測。

特點：
（1）與傳統(tǒng)的Western Blot相比，抗體芯片效率更高：
（2）節(jié)省樣本，樣本量少，100ul可檢測幾十個指標！
（3）適用范圍廣，20余種研究領域全覆蓋，科研從此不再受限！
（4）高靈敏度：靈敏度高達pg/ml，科研數據更精準！

檢測種屬：人、小鼠、大鼠
可檢測樣本：細胞培養(yǎng)上清、細胞組織裂解液、血清、血漿等
樣本體積：定量芯片50-100ul
靈敏度：pg/ml

五、PCR Array（信號通路基因表達芯片）
原理：
96孔板每孔預置特定基因引物探針（SYBR或TaqMan）；加入cDNA后，qPCR儀同時擴增90–380個基因，通過ΔΔCt法或標準曲線，獲得各基因相對/絕對表達量。

特點：
（1）轉錄水平“多因子”，與蛋白結果互補；
（2）通路聚焦（炎癥小體、腫瘤免疫、代謝酶）。
（3）不受蛋白分泌/降解動力學影響，適合機制上游研究。
（4）僅測mRNA，需驗證蛋白水平；RNA質量決定成敗。

總RNA起始量10ng–2µg；
靈敏度可檢測單拷貝；
動態(tài)范圍6–7logs；CV<5%。 

六、CBA（Cytometric Bead Array，流式微球陣列）
原理：
與前述Luminex類似，CBA也是基于微珠的檢測方法。將微珠用不同熒光染料染色，每種特定熒光的微珠包被特定分析物的抗體。添加帶有熒光素標記的檢測抗體后，通過檢測抗體的熒光強度來量化分析物，能同時讀取多達10多種不同分析物。

特點：
（1）實驗室已有流式即可上手，零硬件門檻。
（2）使用30–50µL樣本，動態(tài)范圍4logs，靈敏度10–20pg/mL；
（3）通量低于Luminex，Panel≤13；
（4）微球沉降快，需及時上機。

樂備實是國內專注于提供高質量蛋白檢測以及組學分析服務的實驗服務專家，自2018年成立以來，樂備實不斷尋求突破，公司的服務技術平臺已擴展到單細胞測序、空間多組學、流式檢測、超敏電化學發(fā)光、Luminex多因子檢測、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學等30多個，建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細胞以及組織水平實驗的完整檢測體系。