Pipetty電動移液器在牙膏金黃色葡萄球菌檢驗中的應用

方案摘要：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性，是革蘭氏陽性菌的代表菌株，也是常見的食源性致病微生物。本次實驗采用Baird-Parker平板培養(yǎng)法，搭配Pipetty電動移液器實現牙膏中金黃色葡萄球菌的精準、高效檢測，相比傳統(tǒng)手動移液器，顯著提升了檢驗過程的準確性、便捷性與重復性。
 
方案詳情：
一、實驗準備
1、儀器和設備
① 顯微鏡。
② 恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。
③ 離心機。
④ 恒溫水浴箱。
⑤ 試管：18 mm×150 mm。
⑥ 載玻片。
⑦ 酒精燈。
⑧ 三角瓶：250 mL。
⑨ 高壓滅菌器。
⑩ 滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑭ Pipetty電動移液器0.1-20μL、5-1000μL、1-10ML。
 
2、培養(yǎng)基和試劑
① SCDLP 液體培養(yǎng)基
② 營養(yǎng)肉湯
③ 7.5%氯化鈉肉湯
④ Baird Parker平板
⑤ 血瓊脂平板
⑥ 甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基    
⑦ 滅菌液體石蠟
⑧ 兔（人）血漿制備
 
二、 實驗步驟
1、采用Pipetty 10 mL電動移液器進行培養(yǎng)基分裝，通過預設量程直接精準分裝90 mL SCDLP液體培養(yǎng)基至三角燒瓶。后續(xù)置于36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h±2 h。Pipetty電動移液器通過微型電機控制，精準移取，無殘留、無飛濺，確保每個三角燒瓶中培養(yǎng)基與檢液比例精準一致，為后續(xù)增菌效果的穩(wěn)定性提供保障。
 

1. 自上述增菌培養(yǎng)液中，用Pipetty 1 mL電動移液器吸取0.1 mL培養(yǎng)液，滴加至Baird Parker平板（或血瓊脂平板）中央，采用無菌涂布棒均勻涂布，置36℃±1℃培養(yǎng)48 h±2 h。菌落特征：血瓊脂平板上菌落呈金黃色，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈；Baird Parker平板上為圓形、光滑、凸起、濕潤，顏色呈灰色到黑色，邊緣淡色，周圍有混濁帶及外層透明帶，菌落質地似奶油樹膠。挑取單個菌落分純至血瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h。

 

1. 如需進行菌液涂片，可使用Pipetty 0.1-20 μL微量電動移液器吸取少量菌懸液，滴加至載玻片中央，避免傳統(tǒng)操作中菌量過多導致染色不均。鏡檢特征：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌，排列成葡萄狀，無芽胞，無莢膜，致病性菌株菌體直徑約0.5-1 μm。

4、挑取分純后的菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，吸取滅菌液體石蠟，精準滴加2-3 mm高度至培養(yǎng)基液面，置36℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h。判定標準：金黃色葡萄球菌能發(fā)酵甘露醇產酸，培養(yǎng)基顏色由紫變黃。
5、用Pipetty 電動移液器吸取1:4新鮮血漿0.5 mL置于滅菌小試管中，加入待檢菌24 h±2 h營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物0.5 mL，混勻后置36℃±1℃恒溫環(huán)境，每半小時觀察一次，6 h內出現凝塊即為陽性。對照設置：用同一移液器分別移取陽性菌株、陰性菌株培養(yǎng)物及空白營養(yǎng)肉湯各0.5 mL，與0.5 mL血漿混合，確保對照樣品加樣量與待檢樣品完全一致。
 
6、從營養(yǎng)瓊脂平板挑取純化可疑菌落，用Pipetty電動移液器吸取無菌稀釋液，精準制備濁度適當的菌懸液，確保菌懸液濃度標準化，提升鑒定系統(tǒng)的匹配度與鑒定準確性。
三、結果報告
被檢樣品經增菌分離培養(yǎng)后，平板上出現可疑菌落，經染色鏡檢證實為革蘭氏陽性葡萄球菌，且甘露醇發(fā)酵試驗產酸、血漿凝固酶試驗陽性者，可報告檢出金黃色葡萄球菌。