AO/PI又快又準(zhǔn)零干擾！Cellometer Ascend細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的優(yōu)勢(shì)特性

在細(xì)胞治療產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)過(guò)程中，細(xì)胞活力檢測(cè)的準(zhǔn)確性直接影響產(chǎn)品的放行質(zhì)量與最終療效。目前市場(chǎng)上常用的檢測(cè)方法包括AO/PI與AO/DAPI等，然而AO/DAPI在模擬真實(shí)實(shí)驗(yàn)條件下（如低溫/營(yíng)養(yǎng)剝奪模型）表現(xiàn)不佳，誤差可達(dá)10%–30%，嚴(yán)重影響結(jié)果的可靠性�！禞ournal of Fluorescence》上發(fā)表的一項(xiàng)研究明確指出：AO/PI染色法在穩(wěn)定性、靈敏度及抗干擾性方面均顯著優(yōu)于AO/DAPI，更適用于細(xì)胞治療領(lǐng)域中對(duì)細(xì)胞活力的精準(zhǔn)檢測(cè)。瑞孚迪（Revvity）率先實(shí)現(xiàn)AO/PI染色法的商業(yè)化應(yīng)用，瑞孚迪推出全新一代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀Cellometer Ascend，推動(dòng)細(xì)胞質(zhì)檢進(jìn)入高信度時(shí)代。

AO/PI的三大優(yōu)勢(shì)特性[1]

Part.01時(shí)間無(wú)關(guān)性：染色時(shí)長(zhǎng)“零影響”

AO/DAPI的局限：在低溫/營(yíng)養(yǎng)剝奪（LT/ND）模型中，30分鐘內(nèi)死細(xì)胞活力讀數(shù)從26%下降至11%，DAPI需更長(zhǎng)時(shí)間滲透死細(xì)胞，穩(wěn)定結(jié)果需等待超過(guò)30分鐘。

AO/PI的優(yōu)勢(shì)：染色時(shí)間在0–40分鐘內(nèi)，細(xì)胞活力幾乎無(wú)波動(dòng)，加熱致死（HK）與LT/ND死細(xì)胞活力均穩(wěn)定在0%。

機(jī)制解析：PI與DNA雙鏈結(jié)合無(wú)序列偏好性，而DAPI偏向結(jié)合AT富集區(qū)，因此PI標(biāo)記更快、更全面，DAPI則需更長(zhǎng)時(shí)間。

Part.02死細(xì)胞高靈敏度：正交驗(yàn)證逼近0%

即便在細(xì)胞凋亡/壞死導(dǎo)致DNA斷裂的情況下，碎片化DNA無(wú)法被識(shí)別為完整細(xì)胞，AO/PI仍可準(zhǔn)確區(qū)分細(xì)胞生死狀態(tài)，為細(xì)胞治療產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)與質(zhì)控提供堅(jiān)實(shí)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

·AO/PI在5天培養(yǎng)中始終保持~0%活力讀數(shù)，準(zhǔn)確判斷細(xì)胞完全死亡。

·AO/DAPI持續(xù)高估細(xì)胞活力（HK模型約5%，LT/ND模型從20%緩慢下降），無(wú)法全面識(shí)別死細(xì)胞。

Part.03抗干擾性：FRET機(jī)制杜絕假陽(yáng)性

AO/PI借助FRET機(jī)制實(shí)現(xiàn)快速、穩(wěn)定、特異性的死細(xì)胞標(biāo)記，不受染色時(shí)長(zhǎng)干擾。相反，AO/DAPI染色緩慢且不完全，隨時(shí)間推移不斷產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)（AO+/DAPI-），無(wú)法真實(shí)反映樣本狀態(tài)。

Cellometer Ascend：

更精準(zhǔn)可靠高效

01明場(chǎng)和雙熒光通道，適合多細(xì)胞類型

Cellometer Ascend具有明場(chǎng)、紅/綠熒光兩種通道，兩種通道結(jié)合分析結(jié)果更加真實(shí)、準(zhǔn)確�？煞治龆喾N細(xì)胞類型(包括原代細(xì)胞和細(xì)胞系)，可通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)、AO/PI多種染色方法進(jìn)行細(xì)胞活力、細(xì)胞直徑檢測(cè)，從而進(jìn)一步評(píng)估細(xì)胞質(zhì)量，確保用于治療的細(xì)胞具有良好的活性。02基準(zhǔn)點(diǎn)聚焦/基于圖像的自動(dòng)聚焦

以確保在不同樣本條件下都能獲得清晰的圖像，基準(zhǔn)點(diǎn)聚焦方式對(duì)于低濃度樣品也可以準(zhǔn)確快速檢測(cè)，濃度低至2x104個(gè)細(xì)胞/mL的樣本（CV<10%）；

369mm2超大成像面積

可捕獲約為血球計(jì)數(shù)板4-17倍的采樣面積，最大可達(dá)到69mm2，特別適用于低濃度的細(xì)胞樣本細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠快速、準(zhǔn)確地測(cè)定細(xì)胞濃度；

4細(xì)胞輪廓精準(zhǔn)識(shí)別

基于細(xì)胞輪廓的專有識(shí)別算法，對(duì)于成團(tuán)細(xì)胞也能準(zhǔn)確分割。

優(yōu)勢(shì)方法+高效平臺(tái)

=細(xì)胞治療質(zhì)檢新范式

本研究通過(guò)模擬真實(shí)生產(chǎn)環(huán)境的低溫/營(yíng)養(yǎng)剝奪模型證實(shí)：AO/PI憑借其時(shí)間無(wú)關(guān)性、高死細(xì)胞靈敏度與優(yōu)異抗干擾性，為細(xì)胞活力檢測(cè)提供了更優(yōu)解。Cellometer Ascend作為該方法的理想搭載平臺(tái)，以全自動(dòng)檢測(cè)、高通量處理和精準(zhǔn)算法，為細(xì)胞治療企業(yè)提供從研發(fā)到生產(chǎn)放行的全周期質(zhì)控支持。