基于zenCELL owl 成像解析卵巢癌腹水對細(xì)胞遷移的影響

卵巢癌（Ovarian Cancer ，OC），是一種常見的婦科腫瘤，致死率高居婦科癌癥首位，全球每年致死人數(shù)達(dá)15萬。其總體預(yù)后較差，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，主要源于腹膜轉(zhuǎn)移和惡性腹水的產(chǎn)生。在卵巢癌的晚期，如III期和IV期，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到腹腔，同時伴有持續(xù)炎癥產(chǎn)生的惡性腹水。腹水是原癌細(xì)胞及癌細(xì)胞相關(guān)的流體微環(huán)境，該微環(huán)境的pH值或含氧量等各種因素，以及周圍組織代謝物濃度，都可能導(dǎo)致癌細(xì)胞的改變和突變，增加腫瘤異質(zhì)性。值得注意的是，雖然不清楚腹水如何影響腫瘤代謝和復(fù)發(fā)，但與外周血相比，腹水中腫瘤標(biāo)志物出現(xiàn)時間可能更早，因此具有很高的診斷潛力。
德國圖賓根大學(xué)醫(yī)院的Christoph Trautwein等人應(yīng)用pH依賴性的探索方法和多種技術(shù)，如基于流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞因子測定和基于核磁共振（NMR）的代謝組學(xué)分析，以更深入地表征腹水并確定腹水對卵巢癌的影響，研究成果以“Acidic ascites inhibits ovarian cancer cell proliferation and correlates with the metabolomic, lipidomic and inflammatory phenotype of human patients”為題發(fā)表在《Journal of Translational Medicine》雜志上。

研究者采集了10例癌癥卵巢切除患者的惡性腹水標(biāo)本，1H-NMR的代謝組學(xué)、基于血氣分析儀的氣流分析和流式細(xì)胞術(shù)，分別對腹水樣品進(jìn)行深入表型分析。通過調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值，培養(yǎng)3D球體細(xì)胞和卵巢腫瘤細(xì)胞，用掃描電子顯微鏡（SEM）檢查其形態(tài)學(xué)變化，并用MTT法、粘附法、流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞劃痕/遷移實驗評估不同pH下卵巢腫瘤的代謝活性、粘附、抗凋亡和細(xì)胞遷移能力。同時在實驗樣品中加入10%的惡性腹水來評估腹水在不同pH下對腫瘤細(xì)胞的影響。
研究者采用德國innoME公司的zenCELL owl 實時活細(xì)胞成像分析儀進(jìn)行細(xì)胞劃痕遷移實驗，測定OAW42卵巢癌細(xì)胞在體外不同的pH（6.0/6.5/7.0/7.5）條件下的遷移能力。

具體方法：將OAW42細(xì)胞接種在24孔板中培養(yǎng)過夜，然后用10μl槍頭制造標(biāo)準(zhǔn)傷口。用PBS洗滌細(xì)胞兩次，在一半的孔內(nèi)加入10%的惡性腹水，并將細(xì)胞培養(yǎng)基滴定至不同的pH（6.0、6.5、7.0、7.5）。將培養(yǎng)板置于37°C的培養(yǎng)箱中，并通過zenCELL owl進(jìn)行長時間實時活細(xì)胞成像監(jiān)測。分別記錄6、24和36小時的細(xì)胞遷移程度相對于初始劃痕的傷口寬度，用%表示。

結(jié)果表明（圖1），在酸性環(huán)境中，癌細(xì)胞的遷移能力因pH改變受到抑制，當(dāng)10%惡性腹水與癌細(xì)胞共培養(yǎng)時，惡性腹水幫助卵巢癌細(xì)胞抵抗該抑制作用繼續(xù)維持遷移能力。
德國InnoME公司的zenCELL owl 實時活細(xì)胞成像分析儀，基于無標(biāo)記、非侵入方法，原位記錄細(xì)胞實時生長和定量的圖片、視頻、統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)。體型小巧，耐溫耐濕，可在培養(yǎng)箱內(nèi)長時間連續(xù)工作；24個獨立通道，對24個視野連續(xù)的動態(tài)監(jiān)測和圖像獲取；實現(xiàn)細(xì)胞增殖／增殖抑制、細(xì)胞劃痕/遷移／侵襲，細(xì)胞吞噬/殺傷等諸多活細(xì)胞行為動態(tài)過程、分組對比的監(jiān)測；廣泛用于細(xì)胞藥化實驗、細(xì)胞毒理研究、藥物研發(fā)、腫瘤免疫研究、細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化、類器官研究等領(lǐng)域。