醬油中苯甲酸鈉含量的測(cè)定

引言
醬油作為我國(guó)傳統(tǒng)發(fā)酵調(diào)味品，以大豆、小麥等為主要原料，經(jīng)微生物發(fā)酵制成，憑借獨(dú)特的風(fēng)味和豐富的營(yíng)養(yǎng)，成為烹飪中不可或缺的食材。隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，為延長(zhǎng)醬油保質(zhì)期、抑制微生物滋生，防腐劑的添加成為行業(yè)常規(guī)操作。苯甲酸鈉因價(jià)格低廉、抑菌效果顯著，被廣泛應(yīng)用于醬油生產(chǎn)中，但過量攝入會(huì)對(duì)人體健康造成潛在危害，如引發(fā)胃腸道不適、影響肝腎功能等[1-3]。我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760—2024）明確規(guī)定醬油中苯甲酸鈉的最大使用量不得超過1.18g·kg-1。
目前，食品中苯甲酸鈉的檢測(cè)方法主要依據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》（GB5009.28—2016），包含有氣相色譜法、高效液相色譜法等。現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)雖然具有較高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，但儀器設(shè)備昂貴、操作流程煩瑣、周期長(zhǎng)、維護(hù)費(fèi)用高，難以很好地適應(yīng)基層檢測(cè)的需要[4-7]。紫外可見分光光度法因操作簡(jiǎn)單、儀器費(fèi)用低廉、檢測(cè)速度快、日常維護(hù)方便而被廣泛用于食物檢測(cè)。因此，本研究采用紫外可見分光光度法，優(yōu)化樣品前處理工藝和檢測(cè)條件，建立醬油中苯甲酸鈉的快速檢測(cè)方法，旨在為醬油產(chǎn)品質(zhì)量控制和食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。

1　材料與方法
1.1　材料與試劑
選取市售不同品牌、不同規(guī)格的醬油樣品6份，編號(hào)S1～S6，涵蓋釀造醬油、鮮味醬油、紅燒醬油等主流類型，樣品均在保質(zhì)期內(nèi)，常溫密封保存。
苯甲酸鈉（含量大于99.5%），上海阿拉丁生物化學(xué)技術(shù)股份有限公司；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、鹽酸（36.0%～38.0%）、氫氧化鈉、二乙醚（均為分析純），西隴科學(xué)股份有限公司；L-谷氨酸鈉（L谷氨酸鈉）、L-丙氨酸（L-丙氨酸）、甘氨酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水（電阻率不小于18.2mΩ·cm）。

1.2　儀器與設(shè)備
紫外可見分光光度計(jì)；電子秤；酸堿儀；恒熱水浴。

1.3　實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1　標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg·mL-1）：準(zhǔn)確稱取0.5000g苯甲酸鈉基準(zhǔn)試劑，用超純水溶解，轉(zhuǎn)入500mL容量瓶，定容至刻度，在4℃處冷藏，貯存7d。
苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別移取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL和4.00mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于25mL比色管中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的磷酸二氫鈉溶液定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為10、20、40、60、80、100、120、140μg·mL-1和160μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。
氨基酸混合干擾液（1mg· mL-1）：準(zhǔn)確稱取0.1000gL-谷氨酸鈉、0.1000gL-丙氨酸、0.1000g甘氨酸，用超純水溶解，置于100mL容量瓶，定容至刻度，搖勻，待用。

1.3.2　樣品前處理
精密吸取50.00mL的醬油樣本于100mL燒杯內(nèi)，用1mol·L-1的鹽酸調(diào)整pH值為3.0，將其混合后放置30min。將試樣轉(zhuǎn)入125mL分液漏斗中，用2000mL乙醚振蕩提取15min，然后進(jìn)行層析，得到上層醚萃取物。將提取物反復(fù)提取2次，將3種提取物混合到另外一個(gè)分液漏斗中，再添加25mL的5%磷酸二氫鈉進(jìn)行反向提取，搖勻10min，然后將其分層，將底層的水相收集起來。取水相轉(zhuǎn)移至100mL燒杯中，置于60℃恒溫水浴鍋中加熱30min，去除殘留乙醚。冷卻后將溶液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用5%磷酸二氫鈉溶液定容至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜后備用。

1.3.3　儀器檢測(cè)條件
掃描波長(zhǎng)200～300nm，比色皿規(guī)格為1cm石英比色皿，參比溶液為5%磷酸氫二鈉溶液，掃描速度中速，狹縫寬度2nm。以工作吸光度為縱軸，以質(zhì)量濃度為橫軸繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試樣吸光度計(jì)算苯甲酸鈉的含量。

1.3.4　方法學(xué)驗(yàn)證
（1）檢出限與定量限。以3倍信噪比（S/N=3）計(jì)算方法檢出限，以10倍信噪比（S/N=10）計(jì)算定量限。
（2）精密度實(shí)驗(yàn)。選取同一醬油樣品（S2），按照1.3.2和1.3.3步驟進(jìn)行6次平行測(cè)量，并計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。
（3）加標(biāo)回收率試驗(yàn)。選取9份醬油（S2），測(cè)定其苯甲酸鈉含量，分為3組，每組3份，分別加入低、中、高3個(gè)水平的苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品前處理和檢測(cè)方法操作，計(jì)算加標(biāo)回收率。
（4）干擾實(shí)驗(yàn)。在醬油樣品處理液中加入適量氨基酸混合干擾液，使氨基酸含量與醬油中常見含量水平一致，測(cè)定其吸光度，考察氨基酸對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾情況。

2　結(jié)果與分析
2.1　檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
取40μg·mL-1苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液，在200～300nm波長(zhǎng)處進(jìn)行掃描，得到紫外吸收光譜圖（圖1）。由圖1可知，苯甲酸鈉在232nm處出現(xiàn)最大吸收峰，且峰形對(duì)稱、基線平穩(wěn)，無明顯雜峰干擾，因此確定232nm為最優(yōu)檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2　線性關(guān)系、檢出限及定量限分析
在質(zhì)量濃度為10～160μg·mL-1時(shí)，苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖2）。線性回歸方程為A=0.00852C+0.0214，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9996。方法檢出限為0.15μg·mL-1，定量限為0.50μg·mL-1，滿足醬油中苯甲酸鈉痕量檢測(cè)要求。

2.3　精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
對(duì)同一醬油樣品（S2）進(jìn)行6次平行測(cè)定，結(jié)果如表1所示。樣品中苯甲酸鈉平均含量為0.612g·kg-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.87%，說明本研究的結(jié)果具有較好的準(zhǔn)確性，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠。

2.4　加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
選擇醬油樣品（S2）進(jìn)行低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。平均回收率在97.32%～102.15%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.23%～2.05%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿足《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T27417—2017）的規(guī)定，測(cè)定結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性。

2.5　干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
在醬油樣品處理液中加入氨基酸混合干擾液后，在200～300nm進(jìn)行掃描，得到吸收光譜圖（圖3）。由圖3可知，加入氨基酸混合液后，樣品的吸收光譜與未加干擾液的光譜基本重合，最大吸收峰位置和吸光度值無顯著變化（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%），表明L-谷氨酸鈉、L-丙氨酸、甘氨酸等醬油中常見氨基酸對(duì)苯甲酸鈉的檢測(cè)無明顯干擾，說明方法選擇性良好。

2.6　實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果分析
采用建立的方法對(duì)6份市售醬油樣品進(jìn)行苯甲酸鈉含量測(cè)定，結(jié)果如表3所示。6份樣品中均檢測(cè)出苯甲酸鈉，含量在0.428～0.735g·kg-1，均低于GB2760—2024規(guī)定的1.18g·kg-1限量標(biāo)準(zhǔn)，其中樣品S6含量最低，樣品S4含量最高，整體符合食品安全要求。

3　結(jié)論
本研究通過優(yōu)化樣品前處理工藝（pH值為3.0條件下乙醚萃取3次，磷酸氫二鈉反萃�。┖蜋z測(cè)條件（檢測(cè)波長(zhǎng)223nm），建立基于紫外可見分步和發(fā)展提供有力的技術(shù)支持。
文章來源：[1]許琰.醬油中苯甲酸鈉含量的測(cè)定研究[J].食品安全導(dǎo)刊,2025,19(33):65-67+73.DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2025.33.008.