Y型水迷宮研究：鋅與海爾福口服液對(duì)鉛染毒小鼠記憶障礙的改善作用

鉛是一類典型的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育毒物，可干擾神經(jīng)細(xì)胞的成熟過程，并影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放，最終導(dǎo)致學(xué)習(xí)與記憶能力的下降[1]。海爾�？诜�液是由我院研制的保健類制劑，前期試驗(yàn)證實(shí)它能夠提升鉛中毒小鼠的血紅蛋白含量，并降低ALT活性[2]。為了進(jìn)一步明確其對(duì)記憶障礙的作用機(jī)制，我們?cè)趶?fù)雜迷宮實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用Y型水迷宮測(cè)定小鼠的逃避潛伏期和平均達(dá)標(biāo)率，以驗(yàn)證療效的可靠性。

有文獻(xiàn)報(bào)道，血鉛水平與血鋅水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，缺鋅狀態(tài)可能會(huì)增加機(jī)體對(duì)鉛的吸收[3]。因此，本研究還加入了鋅干預(yù)，旨在探討鋅與海爾福口服液在改善鉛致小鼠記憶損害中的協(xié)同或相互作用。

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
昆明種健康雄性小鼠60只，日齡約35天，平均體重20 g。由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，均為合格級(jí)。

1.2 試劑

• 醋酸鉛：國(guó)產(chǎn)分析純；

• 海爾�？诜�液：由銀花、茯苓、甘草等中藥材提取，經(jīng)水煎、乙醇沉淀等工藝制成；

• 葡萄糖酸鋅口服液：哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)05040331。

1.3 Y型水迷宮實(shí)驗(yàn)方法
Y型水迷宮裝置由一條長(zhǎng)臂與兩條短臂組成：長(zhǎng)臂40 cm×15 cm，短臂30 cm×15 cm，高度20 cm。左側(cè)短臂設(shè)置逃生平臺(tái)，右側(cè)短臂封閉作為暗道。水深10 cm，溫度維持在（28±0.5）℃。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠從長(zhǎng)臂端輕輕放入，若其在10 s內(nèi)游至平臺(tái)即記為正確。小鼠到達(dá)平臺(tái)休息15 s后重復(fù)訓(xùn)練。每只動(dòng)物每天訓(xùn)練10次，共5天。以平均逃避潛伏期和正確反應(yīng)率作為記憶能力指標(biāo)[4]，若潛伏期超過10 s，則按10 s計(jì)。

1.4 染毒與處理方法
小鼠隨機(jī)分為5組：鋅治療組、鋅+海爾福治療組、海爾福治療組、單純鉛染毒組、陰性對(duì)照組。

• 除對(duì)照組外，其余各組均以2 g/L醋酸鉛溶液按0.007 ml/g體重劑量進(jìn)行腹腔注射，每日一次，連續(xù)35天；

• 對(duì)照組注射等體積生理鹽水；

• 染毒14天后開始干預(yù)：

  • 鋅治療組：灌胃葡萄糖酸鋅（0.02 mg/只/天）；

  • 海爾福治療組：灌胃海爾福口服液（0.1 ml/只，稀釋1倍）；

  • 聯(lián)合組：灌胃鋅與海爾�；旌弦�，劑量同單用組；

  • 其余組給予等體積蒸餾水。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2.1 逃避潛伏期
單純鉛染毒組的潛伏期顯著延長(zhǎng)，與其余組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01或p<0.05）。單用鋅或海爾福的組別均表現(xiàn)出較短的潛伏期，而鋅+海爾福組的效果反而弱于單用組（p<0.05）。隨訓(xùn)練天數(shù)增加，各組潛伏期均呈縮短趨勢(shì)（p<0.01）。

2.2 平均逃避達(dá)標(biāo)率
鋅+海爾福組與單純鉛染毒組的平均達(dá)標(biāo)率較低，而鋅治療組與單純鉛染毒組相比差異顯著（p<0.05）。總體趨勢(shì)顯示，從第1天到第5天，各組達(dá)標(biāo)率逐漸上升。

Y型水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示，單用鋅或海爾福口服液均能明顯改善鉛中毒小鼠的記憶損害，表現(xiàn)為潛伏期縮短、達(dá)標(biāo)率升高。鋅的保護(hù)作用可能與其誘導(dǎo)金屬硫蛋白（MT）結(jié)合鉛，從而減輕毒性，以及拮抗鉛對(duì)ALAD抑制作用有關(guān)[5]。海爾�？诜�液中含有茯苓等抗氧化成分，可對(duì)抗鉛引起的腦組織脂質(zhì)過氧化，因而具有神經(jīng)保護(hù)作用[6]。

值得注意的是，鋅與海爾福聯(lián)合應(yīng)用的效果不及單用，提示兩者之間可能存在拮抗現(xiàn)象。具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。