Simoa N4PE神經(jīng)四重試劑盒助力神經(jīng)領(lǐng)域生物標(biāo)志物研究

Simoa單分子免疫陣列分析技術(shù)是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測技術(shù)之一，可以檢測單個蛋白分子，靈敏度達到飛克級別。依托Simoa超高靈敏檢測平臺，可對外周血中低含量神經(jīng)因子進行精準(zhǔn)定量，加速神經(jīng)領(lǐng)域生物標(biāo)志物的研究進程，助力中國人群隊列研究。

由Quanterix公司主辦，SBC共同參與的N4PE免費測樣活動進入尾聲，檢測報告正在陸續(xù)發(fā)出，今天就講講如何解讀這些報告中的數(shù)據(jù)圖表。

四個檢測指標(biāo)

• NfL，神經(jīng)元的細(xì)胞質(zhì)中間絲蛋白，與微管和微絲一起形成神經(jīng)元細(xì)胞骨架。Nf-L是與腦損傷、腦中風(fēng)、多發(fā)性硬化癥、癡呆和其他神經(jīng)退行性疾病相關(guān)神經(jīng)元損傷的生物標(biāo)志物，是研究神經(jīng)性疾病最有力的工具之一。
• Aβ40/Aβ42，由淀粉樣前體蛋白經(jīng) β-和 γ-分泌酶的蛋白水解作用而產(chǎn)生的含有40/42個氨基酸的多肽。Aβ的沉積不僅與神經(jīng)元的退行性病變有關(guān)，而且可以激活一系列病理事件，包括星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、血腦屏障的破環(huán)和微循環(huán)的變化等，是阿爾茨海默病人腦內(nèi)老年斑周邊神經(jīng)元變性和死亡的主要原因。
• GFAP，膠質(zhì)纖維酸性蛋白，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中星形膠質(zhì)細(xì)胞表達的蛋白，與多種疾病相關(guān)，如創(chuàng)傷性腦損傷、中風(fēng)、腦腫瘤等。近期揭示其在阿爾茨海默早期出現(xiàn)異常升高，具有作為疾病早期生物標(biāo)志物的潛在可能。

樣本的復(fù)核，試劑盒信息以及樣本前處理信息

由于樣本中殘余的細(xì)胞碎片，較大細(xì)胞器以及密度較大的多聚體可能會影響免疫反應(yīng)的充分進行以及后續(xù)的圖像解析，所以在上樣之前每個樣本在充分解凍后會進行10000g 5min的離心來去除這些物質(zhì)。

標(biāo)曲信息

標(biāo)曲相當(dāng)于一個實驗的“尺子“，用來計算測得樣本的真實濃度，標(biāo)曲的好壞是衡量一次定量檢測實驗的重要指標(biāo)。

以圖中的NfL標(biāo)曲為例，首先是每個濃度點的CV值，也就是重復(fù)測量的離散程度，CV小于20%即認(rèn)為合格，實際上大多數(shù)標(biāo)曲點的CV是小于10%的，說明標(biāo)準(zhǔn)品檢測的精準(zhǔn)性還是很高的。其次是R2，即標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸系數(shù)，也就是每個標(biāo)準(zhǔn)品的點與標(biāo)準(zhǔn)曲線的離散程度，R2越高說明標(biāo)曲的擬合度越好，這把“尺子”的衡量力就越好。此外，標(biāo)曲的橫坐標(biāo)是濃度，單位是pg/mL，縱坐標(biāo)是AEB，是Average Enzyme per Bead的縮寫，即平均每個磁珠上攜帶的酶的個數(shù)。AEB是Simoa磁珠平臺的信號強度單位，當(dāng)形成磁珠-待檢物-酶的復(fù)合物時，我們認(rèn)為磁珠攜帶了酶，是陽性磁珠，但是每個反應(yīng)中會有數(shù)萬的磁珠參與反應(yīng)，那么平均每個磁珠上攜帶的酶的個數(shù)究竟是0.1還是1還是10，會有軟件通過數(shù)字/模擬算法得出。簡而言之，AEB實際就是Simoa平臺中響應(yīng)信號強度的表達方式。

LOD（檢出下限）以及LLOQ（定量檢測下限）

每個因子均標(biāo)有其對應(yīng)的LOD和LLOQ，飛克級別的靈敏度是足以將正常人群中的基線水平進行絕對定量檢測。

質(zhì)控結(jié)果

每次實驗會設(shè)置兩個質(zhì)控，分別為高濃和低濃質(zhì)控，各重復(fù)兩次。質(zhì)控不僅能預(yù)示此次實驗的精確度（重復(fù)之間的CV%），還能預(yù)實準(zhǔn)確度。

樣本結(jié)果

下圖中淡黃色區(qū)域分別為四個神經(jīng)因子指標(biāo)的檢測結(jié)果，濃度為pg/mL。另外，最終濃度是乘以稀釋倍數(shù)之后的濃度。

以上數(shù)據(jù)來自Quanterix，共進行了75個血漿/血清樣本、每個樣本4個神經(jīng)因子的檢測，檢出率高達95%。