Label-free技術(shù)

Label-free技術(shù)即非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做標(biāo)記，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣本中相應(yīng)肽段的信號強度，從而肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。
 
技術(shù)原理
每條肽段的豐度（量）與其在MS1中的峰面積或信號強度成正比；而不同樣本的同一條肽段在色譜上的保留時間是一致的，因此，可通過對比MS圖譜，再整合到相應(yīng)蛋白，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)在不同樣本中的相對表達水平的定量分析。
 
實驗流程
提取樣本中的總蛋白，取出一部分做蛋白濃度測定及SDS-PAGE檢測，另取部分進行胰蛋白酶酶解，對酶解肽段除鹽后，對樣本進行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)分析

技術(shù)特點
1、無需標(biāo)記，操作簡單；
2、不受比較樣品數(shù)限制；
3、對實驗操作穩(wěn)定性、重復(fù)性要求高，要求至少做三次技術(shù)重復(fù)或生物重復(fù)；
4、準(zhǔn)確性較標(biāo)記定量差。
 
應(yīng)用領(lǐng)域
1、適合大樣本量的定量比較
2、對無法用標(biāo)記定量實現(xiàn)的實驗設(shè)計，易用label-free技術(shù)
3、要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫、EST序列（轉(zhuǎn)錄組）或基因組注釋信息