Cygnus AccuRes™——精準(zhǔn)監(jiān)控HCD殘留風(fēng)險

在生物制品的生產(chǎn)過程中，宿主細(xì)胞DNA可能會殘留其中，這將會導(dǎo)致致癌基因或其他風(fēng)險的遺傳物質(zhì)進(jìn)入到最終的藥物制劑中。為了降低這種風(fēng)險，監(jiān)管機(jī)構(gòu)規(guī)定了允許殘留的HCD限度，根據(jù)所使用的細(xì)胞系及給藥方案的不同，允許的HCD殘留范圍在10~100pg/劑量之間。關(guān)于HCD殘留的檢測，《中國藥典2025》通則3407中列出了三種方法，分別是DNA探針雜交法、熒光染色法，以及定量PCR法。而USP General Chapter <509>“Residual DNA Testing”章節(jié)中建議使用基于探針的DNA定量作為驗(yàn)證方法，用于檢測在大腸桿菌（E. coli）或中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞系中生產(chǎn)的重組生物制品，以確保更好的靈敏度和準(zhǔn)確性。在整個生產(chǎn)過程中，質(zhì)控人員需要對DNA水平進(jìn)行評估，這些樣本可能含有其他雜質(zhì)和高濃度的藥物活性成分，因此必需一種可靠且靈敏的DNA定量方法。
2025版中國藥典新增多個單抗藥物的HCD檢測要求：注射用曲妥珠單抗、英夫利西單抗、阿達(dá)木單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗等，以及部分疫苗類（如 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫<50pg每劑）均明確要求采用通則3407第三法（定量PCR法）進(jìn)行檢測。同時新增 <人用抗體偶聯(lián)藥物制品總論>，抗體偶聯(lián)藥物（ADC）納入監(jiān)管，明確規(guī)定需要對外源性雜質(zhì)進(jìn)行監(jiān)控。
       Cygnus Technologies新推出的AccuRes™系列DNA定量試劑盒，依照通則3407第三法（定量PCR法）開發(fā)的，專為用CHO、Human、Vero、E. coli等細(xì)胞系重組表達(dá)生產(chǎn)的生物制品中HCD殘留檢測而設(shè)計(jì)。高濃度樣品可通過最小程度的稀釋后進(jìn)行檢測，從而有效降低檢測限（LOD）。

 
Cygnus AccuRes™系列HCD檢測試劑盒的優(yōu)勢特點(diǎn)：
• 準(zhǔn)確性—Cygnus 專利的 DNA 提取試劑可去除干擾 PCR 的成分。采用探針法進(jìn)行宿主細(xì)胞DNA定量，可特異性檢測目標(biāo)細(xì)胞系/物種（CHO、Human、Vero、E. coli），避免異源DNA干擾；FAM標(biāo)記核酸探針在PCR擴(kuò)增前由BHQ-1™淬滅信號，確保檢測特異性；
• 更好的精確度—CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶體系可有效降低PCR反應(yīng)升溫前的引物錯配和PCR非特異性擴(kuò)增；
• 靈活性—兼容所有能檢測FAM熒光信號的qPCR設(shè)備，降低額外購置設(shè)備的成本
• All-in-one kit支持從樣品到qPCR的全過程—試劑盒中包含了DNA提取試劑（試管法或孔板法），AccuRes™ PCR體系預(yù)混液，引物/探針預(yù)混液和DNA標(biāo)準(zhǔn)品
• 靈敏度—LOD為0.6 fg/µL (CHO), 0.7 fg/ µL (E. coli), 3 fg/uL (human)。
 
Cygnus AccuRes™系列HCD檢測試劑盒操作流程

 

1. DNA提取

Cygnus的DNA提取方法采用了一種新型DNA carrier，能夠回收飛克級別的HCD，提取過程在無蛋白質(zhì)、鹽和表面活性劑污染的環(huán)境中進(jìn)行。這比其他提取方法提高了DNA檢測和擴(kuò)增的可重復(fù)性和穩(wěn)定性。
 

1. 擴(kuò)增

Cygnus AccuRes™ 系列試劑盒中采用高特異性引物/探針體系對目標(biāo)HCD進(jìn)行擴(kuò)增。帶有FAM熒光標(biāo)記的核酸探針在每一次PCR反應(yīng)循環(huán)中被BHQ-1™ 淬滅。先進(jìn)的 CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶反應(yīng)體系降低了非特異性擴(kuò)增，進(jìn)一步確保了qPCR擴(kuò)增的特異性，靈敏度與穩(wěn)定性，同時qPCR體系的配置可以在室溫條件下操作。
 

1. 定量

試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的ct值構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線可將檢測結(jié)果計(jì)算為pg/10μl宿主細(xì)胞殘留DNA，進(jìn)而可將HCD濃度換算為ng/mL, ng/mg或是ng/劑量�；�于該方法，殘留DNA最低可定量的濃度為0.6 fg/µL（CHO）。
 
Cygnus AccuRes™系列HCD檢測試劑盒測試數(shù)據(jù)
準(zhǔn)確性與可重復(fù)性測試。由兩名操作員（A和B）分別在兩天內(nèi)對已知DNA樣本進(jìn)行兩次檢測，計(jì)算檢測結(jié)果的SD, CV和回收率%（見下表）。

 
完整的和不同程度降解的CHO DNA的提取與擴(kuò)增效果對比。將完整的gDNA（Control）與分別用Alu1酶處理30min、1h、1.5h和2h后的DNA（Digested）凝膠電泳圖像。對照組和酶處理30min組樣品擴(kuò)增的線性范圍基本一致（如下圖）。

 
存在外源DNA的情況下，CHO引物/探針仍具有廣泛的線性范圍和特異性。不同濃度的E. coli DNA不會影響CHO DNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖）。

 
過程樣品與藥物原液（DS）檢測結(jié)果對比。對比含有1 mg/mL陰離子交換或陽離子交換純化的蛋白樣品或藥物蛋白的CHO DNA回收率（見下表）。

 
Cygnus AccuRes™系列HCD檢測試劑盒訂購信息

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
CHO AccuRes™ DNA Quantification Kit in Tubes	D1555T	1 kit
CHO AccuRes™ DNA Quantification Kit in Wells	D1555W	1 kit
CHO AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1555	1 kit
E. coli AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1415	1 kit
Human AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1165	1 kit
Vero AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1975	1 kit
NS/0 AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1225	1 kit

 
即將上市：

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
SF9 AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1845	1 kit
P. pastoris AccuRes™ Quantitative DNA Kit	D1145	1 kit

 
Cygnus DNA提取試劑盒訂購信息
搭配AccuRes™定量試劑盒一起使用

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
DNA Extraction Kit in Tubes	D100T	1 kit
DNA Extraction Kit in Wells	D100W	1 kit

 
為滿足廣大客戶的需求，Cygnus AccuRes™ DNA 定量試劑盒全線產(chǎn)品特價促銷火熱進(jìn)行中，歡迎您咨詢Cygnus中國區(qū)總代理北京西美杰科技有限公司了解活動詳情。
 

Cygnus Technologies, LLC.為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法，旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測超過50種不同表達(dá)系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測的高靈敏度分析技術(shù)的專家，Cygnus的產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過25年。

北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理，與國內(nèi)眾多知名藥企，CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段，提高藥物質(zhì)量、純度和安全，加速優(yōu)化研發(fā)工藝，減少產(chǎn)品上市時間，降低QC成本。如您對上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.xmjsci.com了解更多信息。