單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）的法規(guī)要點(diǎn)整理與解讀

1. 法規(guī)核心：EP11.8新增通則，以MAT法取代RPT法，成為熱原檢測(cè)的首選，要求企業(yè)優(yōu)先采用。
2. 監(jiān)管協(xié)同：全球多國(guó)藥典認(rèn)可MAT，中國(guó)藥典2025版進(jìn)一步完善相關(guān)要求。
3. 方法要點(diǎn)：MAT法在細(xì)胞系、NEP對(duì)照、結(jié)果解讀等方面的更新細(xì)節(jié)。
4. 企業(yè)行動(dòng)：需完成方法轉(zhuǎn)型、文件更新及合規(guī)申報(bào)。

《歐洲藥典》（EP）11.8新增“5.1.13 熱原性（Pyrogenicity）”通則，正式取代原有家兔熱原檢測(cè)（RPT），明確單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）為熱原檢測(cè)首選方法，并要求企業(yè)在產(chǎn)品放行檢測(cè)中優(yōu)先采用。這一革命性的修訂標(biāo)志著EP徹底完成了熱原檢測(cè)從動(dòng)物試驗(yàn)向體外試驗(yàn)的轉(zhuǎn)型，與全球動(dòng)物福利（3R原則）趨勢(shì)完全契合。

熱原檢測(cè)由RPT轉(zhuǎn)為MAT，也是契合了現(xiàn)在形勢(shì)下藥物開(kāi)發(fā)新方法體系（New Approach Methodolodgy，NAM）的發(fā)展潮流。

一、全球監(jiān)管協(xié)同：MAT從“鼓勵(lì)”到“必須”之路
2005年 ECVAM
International validation of novel pyrogen tests based on human monocytoid cells.
2006年 ISO 10993-1
gives preference to in vitro models when they yield equally relevant information.
2008年 ICCVAM
Validation Status of Five In vitro Test Methods Proposed for Assessing Poteintial Pyrogenicity of Pharmaceuticals and other Products.
2010年 EP<2.6.30>
The monocyte activation test (MAT) is primarily intended to be used as a replacement for the rabbit pyrogen test.
2012年 FDA
MAT Test is mentioned as an alternative to the rabbit test but should be validated according to USP <1225>.
2014年 USP<151>
A validated, equivalent in vitro pyrogen or bacterial endotoxin test may be used in place of the in vivo rabbit pyrogen test, where appropriate.
2016年 JP<17>
the validation of alternative methods is possible only if the alternative method gives better accuracy & precision.
2017年 EP<2.6.30>
This chapter has been revised in 2017 to include the need to use Non-Endotoxin Pyrogens (NEPs) as positive control.
2018年 IP 8th
Include a new chapter on Monocyte Activation test.
2020年 中國(guó)藥典 9301通則
單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）可作為熱原檢查。
2025年 EP<2.6.30>
刪除RPT法后強(qiáng)化MAT作為RPT的法定替代地位。
2025年 中國(guó)藥典 9301通則
單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）可作為熱原檢查方法之一。

MAT在2010年被納入《歐洲藥典》作為替代檢測(cè)手段（EP2.6.30章節(jié)），現(xiàn)已成為評(píng)估全譜系熱原的唯一方法。自2012年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）發(fā)布行業(yè)指南后，MAT即成為替代性熱原檢測(cè)方法。《美國(guó)藥典》（USP）認(rèn)可MAT為替代方法。MAT在俄羅斯和歐亞藥典中被認(rèn)可為藥典方法，在印度、中國(guó)和巴西藥典中作為替代方法，在日本則作為補(bǔ)充方法。

此次法規(guī)變更促使歐盟上市或銷售的注射用藥品、生物制品及醫(yī)療器械的企業(yè)需要考慮：
1、方法轉(zhuǎn)型：需要盡快建立和驗(yàn)證MAT檢測(cè)能力，或?qū)ふ揖邆滟Y質(zhì)的研究機(jī)構(gòu)。
2、文件更新：注冊(cè)檔案中的質(zhì)量控制方法及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序需相應(yīng)修訂。
3、長(zhǎng)遠(yuǎn)視角：此次變革是歐洲藥品監(jiān)管全面減少動(dòng)物試驗(yàn)的一部分，標(biāo)志著以體外檢測(cè)為基礎(chǔ)的新一代檢測(cè)方法將成為未來(lái)趨勢(shì)。

二、歐洲藥典中關(guān)于MAT法更新核心要點(diǎn)
EP11.8作為EP11.0的重要補(bǔ)編，圍繞MAT的標(biāo)準(zhǔn)化、質(zhì)量控制和檢測(cè)結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了精細(xì)化修訂。《中國(guó)藥典》從2020版將MAT列為補(bǔ)充方法，到2025版進(jìn)一步完善相關(guān)要求，成為備選方法之一，也實(shí)現(xiàn)了與國(guó)際法規(guī)的部分協(xié)同。
1、明確單核細(xì)胞系優(yōu)勢(shì)
作為可大規(guī)模生產(chǎn)及長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)具有相同特性的細(xì)胞來(lái)源，其標(biāo)準(zhǔn)化特性是傳統(tǒng)全血或外周血單個(gè)核細(xì)胞無(wú)法企及的。EP11.8明確規(guī)定經(jīng)鑒定的細(xì)胞系對(duì)內(nèi)毒素和非內(nèi)毒素?zé)嵩�（NEP）均能檢測(cè)。
2、非內(nèi)毒素?zé)嵩瓕?duì)照要求細(xì)化
增加特殊反應(yīng)情況下NEP多種結(jié)果解讀的可能性。
3、檢測(cè)結(jié)果解讀改變
EP11.8對(duì)MAT結(jié)果判斷更加謹(jǐn)慎，例如3個(gè)連續(xù)稀釋梯度無(wú)法同時(shí)滿足要求的情況。
4、標(biāo)準(zhǔn)曲線
對(duì)標(biāo)曲的類型可以多樣化，可接受標(biāo)準(zhǔn)要求更加明確。

表 《歐洲藥典》與《中國(guó)藥典》關(guān)于MAT法的要點(diǎn)對(duì)比

• 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線合格；
• 測(cè)試溶液對(duì)IL-6表達(dá)無(wú)干擾；
• ELISA 對(duì)IL-6定量無(wú)干擾；
• 對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩�能檢出。

當(dāng)然，我們所使用的MAT試劑盒需要供應(yīng)商有按照ICH Q2(R2)指導(dǎo)原則進(jìn)行全面的性能驗(yàn)證，包括線性、范圍、檢出限、定量限、中間精密度、重復(fù)性、專屬性等。

在EP框架下采用MAT，企業(yè)可以節(jié)省大量前期驗(yàn)證資源，將精力聚焦于與自身產(chǎn)品相關(guān)的特異性驗(yàn)證上，這是兼顧科學(xué)、合規(guī)與效率的重要進(jìn)步。

四、應(yīng)對(duì)EP法規(guī)變化，企業(yè)的行動(dòng)指南
對(duì)企業(yè)而言，變更檢測(cè)方法屬于強(qiáng)制性要求。如果你的產(chǎn)品上市許可文件中仍包含這些動(dòng)物試驗(yàn)，則必須主動(dòng)發(fā)起變更申請(qǐng)將其刪除，并評(píng)估是否需要采用替代方法。同時(shí)，刪除或替換家兔熱原試驗(yàn)需要提交變更申請(qǐng)。

歐洲藥品管理局（EMA）在問(wèn)答中給出了變更申報(bào)類型的建議^[1]：  

• 如申報(bào)資料中已經(jīng)包含適當(dāng)?shù)姆椒ㄇ乙训玫脚鷾?zhǔn)，并且被允許在未進(jìn)行家兔熱原試驗(yàn)的情況下進(jìn)行適當(dāng)控制，則應(yīng)提交IB類變更，以刪除家兔熱原試驗(yàn)。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)包括在提交的材料中。
• 在提出替代方法的情況下，變更的類型將取決于方法的類型。對(duì)于藥典細(xì)菌內(nèi)毒素方法（EP2.6.14或2.6.32），應(yīng)提交IB類變更。對(duì)于藥典單核細(xì)胞活化試驗(yàn)（EP2.6.30 MAT）或非藥典體外方法，應(yīng)提交II類變更。