MAT法在抗生素藥品非內(nèi)毒素?zé)嵩�風(fēng)險(xiǎn)防控中的合規(guī)方案

在全球醫(yī)藥監(jiān)管日益嚴(yán)格的背景下，歐洲藥典（EP，European Pharmacopoeia）對(duì)抗生素的熱原檢測(cè)要求不斷更新。許多品種的方法已從傳統(tǒng)的家兔熱原檢測(cè)法（RPT，Rabbit Pyrogen Test）轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)法（BET，Bacterial Endotoxin Test）。

然而，僅使用BET法可能不足以完全控制熱原風(fēng)險(xiǎn)，非內(nèi)毒素?zé)嵩�（NEP）的“隱形威脅”是當(dāng)前合規(guī)申報(bào)的核心挑戰(zhàn)，這也是單核細(xì)胞活化試驗(yàn)法（MAT）被推上風(fēng)口的關(guān)鍵原因之一。

一、法規(guī)更新的時(shí)間線
（1）2025年7月1日起
EP 11.8補(bǔ)編版正式刪除家兔熱原法（RPT），MAT成為唯一被推薦的替代方法^[1]。

（2）2025年8月
EP 12版本再次強(qiáng)調(diào)：

• EP5.1.13致熱原性章節(jié)規(guī)定“僅用BET必須提供排除NEP的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”。
• EP2.6.30章節(jié)把MAT列為可檢測(cè)所有熱原（含內(nèi)毒素和非內(nèi)毒素）的藥典方法。

（3）2026年開始
歐洲藥品質(zhì)量管理局（EDQM）現(xiàn)場(chǎng)核查已把“有無NEP控制策略”列入高頻缺陷項(xiàng)。

二、抗生素中熱原檢測(cè)發(fā)展歷史概述
EP第三版（1997年版）抗生素?zé)嵩瓩z測(cè)主要以RPT為主，自1986年《歐洲動(dòng)物保護(hù)公約》通過以來，歐洲藥典委員會(huì)加速開展體外替代方法的應(yīng)用，以便響應(yīng)3R原則（減少、優(yōu)化、替代動(dòng)物試驗(yàn)）的推進(jìn)。

表1.抗生素?zé)嵩瓩z測(cè)RPT轉(zhuǎn)變?yōu)锽ET列表^[2]

表2.抗生素?zé)嵩瓩z測(cè)RPT未轉(zhuǎn)變?yōu)锽ET列表

EP已正式廢除RPT，并明確將MAT作為首選替代方法。那么未完成RPT替換的品種該如何錨定適配的熱原檢測(cè)方法？已完成BET替代的49種抗生素，是否就真正實(shí)現(xiàn)了熱原防控的 “高枕無憂”？

EP5.1.13致熱原性一般性章節(jié)中給出答案：

• 只有在排除非內(nèi)毒素?zé)嵩�性物質(zhì)存在的情況下，BET法才適用；
• 如果選擇BET作為檢測(cè)特定產(chǎn)品致熱原性的唯一方法，則必須對(duì)潛在的NEP進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
• 若無法排除NEP的存在，則應(yīng)使用MAT；
• 對(duì)于已獲批工藝，建議評(píng)估其潛在的NEP風(fēng)險(xiǎn)。一旦生產(chǎn)工藝發(fā)生變更，也須開展NEP風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并將報(bào)告隨變更申請(qǐng)一并提交。

三、抗生素申報(bào)合規(guī)風(fēng)險(xiǎn)，非內(nèi)毒素?zé)嵩�恰好�?ldquo;高發(fā)區(qū)”
抗生素生產(chǎn)的復(fù)雜工藝本身，就是NEP的潛在引入點(diǎn)。從上游發(fā)酵的原材料與代謝產(chǎn)物，到下游純化與設(shè)備清潔的每個(gè)關(guān)鍵步驟，均需進(jìn)行前瞻性的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。只有對(duì)全過程進(jìn)行系統(tǒng)審視，才能構(gòu)建起針對(duì)NEP的全面防控體系。

圖1.抗生素發(fā)酵和回收工藝^[4]

風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估內(nèi)容—存在非內(nèi)毒素?zé)嵩�（NEP）的可能性有多大？

1. 生產(chǎn)工藝用菌株的特性：使用菌為G+或G-，評(píng)估是否可能含有脂磷壁酸（LTA）或肽聚糖等熱原成分；評(píng)估特定蛋白表達(dá)水平（例外毒素、其他蛋白質(zhì)）
2. 發(fā)酵工藝殘留革蘭陽性菌（HKSA、LTA）、肽聚糖、酵母多糖等，都屬于NEP。這些雜質(zhì)與LPS協(xié)同刺激，可放大細(xì)胞因子含量，臨床引發(fā)放大熱原反應(yīng)
3. 評(píng)估培養(yǎng)基成分及來源：動(dòng)物源性（是否存在病毒）、植物源性（是否存在霉菌毒素或是否為合成途徑）
4. 原材料的生物負(fù)載
5. 生產(chǎn)工藝中潛在的交叉污染以及環(huán)境監(jiān)測(cè)
6. 下游工藝去除熱原的能力

• 用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取過程，該溶劑能溶解目標(biāo)化合物但不會(huì)溶解水溶性熱原物質(zhì)
• 過濾工藝用于分離如蛋白質(zhì)或DNA/RNA等分子量較高的物質(zhì)
• 通過使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿來改變pH值，這可能會(huì)破壞某些熱原物質(zhì)（即目標(biāo)化合物是穩(wěn)定的）

EP11.8補(bǔ)編 2.6.30-6.5章節(jié)中關(guān)于NEP方法驗(yàn)證要求：

（1）預(yù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)包括使用至少2種NEP配體（如肽聚糖、脂磷壁酸、合成細(xì)菌脂蛋白、鞭毛蛋白等）對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證，其中至少1種需加標(biāo)至待檢制劑中。

（2）如有歷史批次中已證實(shí)受NEP污染物污染的陽性樣品，可優(yōu)先使用；如無則可選擇生產(chǎn)工藝可能引入的NEP對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。
告別合規(guī)盲區(qū)，抗生素藥品的合規(guī)熱原檢測(cè)

湖州申科憑借自主研發(fā)試劑與深厚基質(zhì)分析經(jīng)驗(yàn)，能根據(jù)樣品特殊性精準(zhǔn)提供解決方案，直面歐美申報(bào)的“發(fā)補(bǔ)”要求。

不僅助力企業(yè)完成關(guān)鍵技術(shù)變更（如多黏菌素B/E的RPT至MAT替換）與NEP風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（如鹽酸表柔比星、重組抗體等），更能提供不同類型樣品從前處理方法開發(fā)到申報(bào)支持的全套驗(yàn)證方案，從根本上化解合規(guī)的不確定性，高效推進(jìn)產(chǎn)品出海進(jìn)程。

表3.PyroSup™ 熱原檢測(cè)試劑盒（MAT法）—試劑盒樣品適用性

PyroSup™熱原檢測(cè)試劑盒（單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定MAT法）
 

• 合規(guī)性與申報(bào)基石：細(xì)胞來源清晰，已獲得商業(yè)授權(quán)，規(guī)避申報(bào)合規(guī)風(fēng)險(xiǎn)。
• 監(jiān)管認(rèn)可與性能穩(wěn)定：聯(lián)合權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行全面性能驗(yàn)證，并經(jīng)過客戶及監(jiān)管機(jī)構(gòu)測(cè)試，其質(zhì)量與性能優(yōu)于其他同類型產(chǎn)品。
• 強(qiáng)大的技術(shù)解決能力：該細(xì)胞具備優(yōu)異的技術(shù)適用性，搭配針對(duì)性前處理方案，可輕松突破檢測(cè)場(chǎng)景限制。
• 經(jīng)過實(shí)證的成功案例：已成功支持多個(gè)產(chǎn)品完成歐盟/FDA上市申報(bào)，擁有成熟的申報(bào)經(jīng)驗(yàn)。
• 資質(zhì)認(rèn)證：通過ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證和CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，擁有中、美、歐三地申報(bào)豐富經(jīng)驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)
[1] Europaea, P. (2025) 2.6.30. Monocyte-activation test-11.8.
[2] Source: EDQM; Animal Welfare Progress; PA/PH/SG (07) 8
[3] Europaea, P. (2020) 2.6.30. Monocyte-activation test
[4] Dr. Uwe Lipke | Phasing out the rabbit pyrogen test – the view from the perspective of antibiotics | 15.02.2023 9