LDC7559作為GSDMD抑制劑調(diào)控NETosis在炎癥及神經(jīng)損傷研究中的應(yīng)用

LDC7559（AbMole，M13554）是一種泛凋亡（PANoptosis）相關(guān)分子消皮素 D (GSDMD) 的抑制劑，最初通過從化合物庫中篩選抑制佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞胞外殺菌網(wǎng)絡(luò)（NETosis）而被發(fā)現(xiàn)，它在PMA誘導(dǎo)的NETosis中IC50約為5.6 μM，在膽固醇晶體誘導(dǎo)的NETosis中IC50約為300 nM[1]。早期研究認(rèn)為LDC7559（CAS No.：16561-29-8）通過直接結(jié)合消皮素D（GSDMD）并抑制其N端結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞膜孔洞形成活性，從而阻斷NET釋放和IL-1β分泌。近期研究發(fā)現(xiàn)LDC7559還能通過作為糖酵解酶磷酸果糖激酶-1肝型（PFKL）的強(qiáng)效激動(dòng)劑發(fā)揮作用，其激活PFKL的EC50為66.04 ± 18.93 nM，進(jìn)而抑制NOX2依賴的氧化爆發(fā)和NETosis[1]。在THP-1細(xì)胞和原代神經(jīng)元－小膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，5 μM、25 μM和50 μM的LDC7559可劑量依賴性地改善細(xì)胞活力并抑制IL-1β、IL-6和IL-18等促炎因子的釋放[2]。

    

在動(dòng)物模型中，成年雄性Sprague-Dawley大鼠（體重230-280 g）建立蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）模型后，于造模后2小時(shí)開始腹腔注射LDC7559（10 mg/kg、20 mg/kg或30 mg/kg），每日一次，其中20 mg/kg被確定為該實(shí)驗(yàn)的最佳劑量，可顯著改善神經(jīng)功能缺損評分、減輕腦水腫、抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活及GSDMD介導(dǎo)的神經(jīng)元發(fā)生泛凋亡，且該保護(hù)作用可被NLRP3激活劑-尼日利亞菌素（Nigericin）所逆轉(zhuǎn)[2]。研究顯示LDC7559（AbMole，M13554）還具有神經(jīng)保護(hù)活性，可以在創(chuàng)傷性腦損傷小鼠模型中抑制GSDMD依賴性小膠質(zhì)細(xì)胞的焦亡，其最佳劑量為10 mg/kg[3]。類似地，LDC7559以10 mg/kg的劑量可以有效抑制GSDMD介導(dǎo)的小鼠肺損傷[4]。

參考文獻(xiàn)及鳴謝
[1] Dai, Z.; Liu, W. C.; Chen, X. Y.; et al. Gasdermin D-mediated pyroptosis: mechanisms, diseases, and inhibitors. Frontiers in immunology 2023, 14, 1178662.
[2] Cai, W.; Wu, Z.; Lai, J.; et al. LDC7559 inhibits microglial activation and GSDMD-dependent pyroptosis after subarachnoid hemorrhage. Frontiers in immunology 2023, 14, 1117310.
[3] Yu, E.; Zhang, E.; Lv, X.; et al. LDC7559 exerts neuroprotective effects by inhibiting GSDMD-dependent pyroptosis of microglia in mice with traumatic brain injury. 2023, 40 (7-8), 742-757.
[4] Vats, R. PageCirculating Neutrophil Extracellular Traps Promote Gasdermin-D Dependent Lung Injury in Sickle Cell Disease. University of Pittsburgh, 2021.
 
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)參考
細(xì)胞系：Neutrophils
方法： Cells were pretreated with DMSO vehicle, 0.5 μM NA-11, 100 μM apocynin, 0.5 μM and 5 μM PALP, or 0.5 μM and 5 μM LDC7559 for 30 min, and then stimulated with 50 nM PMA, 1 μM f-MLP, 5 μg/mL cholesterol crystals, 10 μg/mL LPS, 25 μM nigericin, or 25 μM calcymicin for 3 h
濃度：5 μM
處理時(shí)間：30 min
參考文獻(xiàn)：Cell. 2021 Aug 19;184(17):4480-4494.e15.
* 上述方法來自公開文獻(xiàn)，僅供相同目的實(shí)驗(yàn)參考。如實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉牧�、方法不同，請參考其他文獻(xiàn)。
 
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)參考
動(dòng)物模型：Humanized mice with sickle cell disease
配制：Saline
劑量：10 mg/kg
給藥處理：Vaso-occlusion
參考文獻(xiàn)：Blood. 2022 Sep 1;140(9):1020-1037.  

* 上述方法來自公開文獻(xiàn)，僅供相同目的實(shí)驗(yàn)參考。如實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉牧�、方法不同，請參考其他文獻(xiàn)。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的工作液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，當(dāng)天使用；如在配制過程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象，可以通過超聲和（或）加熱的方式助溶。
切勿一次性將產(chǎn)品全部溶解。
建議制定動(dòng)物給藥及實(shí)驗(yàn)方案時(shí)，盡量參考已發(fā)表的相關(guān)實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)（溶劑種類及配比眾多，簡單地溶解目的化合物，并不能解決動(dòng)物給藥依從性、體內(nèi)生物利用度、組織分布等相關(guān)問題，未必能保證目的化合物在動(dòng)物體內(nèi)充分發(fā)揮生物學(xué)效用）。