小鼠Th17極化套裝的技術(shù)原理與應(yīng)用

一、引言
Th17細(xì)胞是以分泌IL-17A為特征性效應(yīng)分子的CD4+ T細(xì)胞亞群，其分化受轉(zhuǎn)錄因子RORγt調(diào)控。Th17細(xì)胞在自身免疫性疾病和炎癥紊亂中發(fā)揮關(guān)鍵作用，同時也在維護(hù)腸道黏膜穩(wěn)態(tài)中具有重要功能。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞存在顯著的異質(zhì)性和可塑性，不同分化條件下獲得的Th17細(xì)胞在致病性和功能特性上存在差異。小鼠Th17極化套裝通過模擬體內(nèi)分化微環(huán)境，為從初始CD4+ T細(xì)胞體外誘導(dǎo)Th17分化提供標(biāo)準(zhǔn)化解決方案，廣泛應(yīng)用于自身免疫疾病機(jī)制研究和免疫調(diào)節(jié)藥物篩選。

二、Th17細(xì)胞的體外分化異質(zhì)性
體外研究表明，不同細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)的Th17細(xì)胞在過繼轉(zhuǎn)移后誘發(fā)自身免疫性疾病的能力存在顯著差異。使用IL-6和TGF-β對初始CD4+ T細(xì)胞進(jìn)行極化，可獲得非致病性Th17細(xì)胞，其特征性表達(dá)IL-10、c-Maf和Ahr，過繼轉(zhuǎn)移后不能誘發(fā)組織炎癥或自身免疫。當(dāng)極化體系中加入IL-1β和IL-23，或使用IL-6、TGF-β聯(lián)合IL-23時，獲得的致病性Th17細(xì)胞高表達(dá)Csf2、Ifng、Tbx21、Il23r和Gzmb，過繼轉(zhuǎn)移后具有高度致病性。

通過時間表達(dá)分析和單細(xì)胞測序技術(shù)，研究者構(gòu)建了Th17細(xì)胞的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，證實(shí)RORγt在分化中的核心作用，同時發(fā)現(xiàn)ATF3、BHLHE40、FOS、NR4A1、EOMES和T-BET等轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控致病性Th17程序，而ETS1、BACH2、FOSL2和RBPJ參與非致病性Th17程序維持。

人類T細(xì)胞亞群中存在與小鼠體外分化相對應(yīng)的非致病性和致病性Th17細(xì)胞。對白色念珠菌特異的Th17記憶細(xì)胞產(chǎn)生IL-17和IFN-γ而不產(chǎn)生IL-10，類似于致病性Th17細(xì)胞；對金黃色葡萄球菌特異的Th17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17和IL-10而無IFN-γ，類似于非致病性Th17細(xì)胞。CXCR3+CCR6+的Th1*細(xì)胞與致病性Th17細(xì)胞相似，在抗分枝桿菌感染中發(fā)揮重要作用。

三、穩(wěn)態(tài)下組織Th17細(xì)胞的異質(zhì)性
利用IL-17命運(yùn)報告小鼠進(jìn)行的體內(nèi)分析揭示了Th17細(xì)胞的可塑性。IL-23R在產(chǎn)生致病性IFN-γ+ Th1/Th17細(xì)胞中起關(guān)鍵作用。在腸道炎癥消退和穩(wěn)態(tài)重建過程中，Th17細(xì)胞上調(diào)抗炎細(xì)胞因子IL-10表達(dá)，促進(jìn)Tr1細(xì)胞產(chǎn)生，表明致病性Th17細(xì)胞可轉(zhuǎn)分化為具有調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞。

通過單細(xì)胞RNA測序?qū)Χ鄠�組織的Th17細(xì)胞進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)組織Th17細(xì)胞表現(xiàn)出組織特異性轉(zhuǎn)錄組特征，提示組織微環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)、代謝物、氧含量等因素塑造了Th17細(xì)胞的功能適應(yīng)。每個組織內(nèi)存在多種功能亞群，包括T濾泡輔助樣（Tfh-like）、效應(yīng)樣、干細(xì)胞樣、增殖型、干擾素刺激基因表達(dá)和Treg樣集群，且具有高度的克隆相關(guān)性，表明組織內(nèi)存在亞群間的動態(tài)轉(zhuǎn)換。

四、小鼠Th17極化套裝的技術(shù)原理
小鼠Th17極化套裝針對小鼠初始CD4+ T細(xì)胞的體外定向分化進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計，通過提供不同極化條件，滿足研究者對非致病性和致病性Th17細(xì)胞的需求。

非致病性Th17極化體系：套裝提供重組小鼠IL-6和TGF-β作為核心誘導(dǎo)因子，啟動RORγt表達(dá)和Th17分化程序。該體系獲得的Th17細(xì)胞高表達(dá)IL-10，適用于研究Th17細(xì)胞在黏膜免疫和穩(wěn)態(tài)維持中的功能。

致病性Th17極化體系：套裝額外提供重組小鼠IL-23和IL-1β，與IL-6和TGF-β聯(lián)合使用，誘導(dǎo)獲得具有高度致病潛能的Th17細(xì)胞。該體系獲得的細(xì)胞高表達(dá)IFN-γ和顆粒酶B（Gzmb），適用于自身免疫疾病機(jī)制研究。

T細(xì)胞激活試劑：套裝提供功能級抗小鼠CD3和抗小鼠CD28抗體，模擬體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞（APC）提供的雙信號刺激，確保初始T細(xì)胞的有效活化�？贵w可采用可溶形式或固相包被形式，根據(jù)實(shí)驗(yàn)體系靈活調(diào)整。

擴(kuò)增支持組分：套裝包含重組小鼠IL-2，支持活化后Th17細(xì)胞的持續(xù)增殖。IL-2以優(yōu)化濃度提供，避免過高或過低濃度對Th17分化的不利影響。

小鼠Th17極化套裝技術(shù)原理與應(yīng)用-南京優(yōu)愛(UA BIO), 重組蛋白專家