AAV腦立體定位注射小鼠實驗的操作流程

腦定位注射，相比其他注射方式靶向性強，注射病毒體積小，但是侵入性也強，且對操作者具有很高的要求。在立體定位手術(shù)時，顱骨上常用的注射參照點是前囟， 也就是中矢狀冠狀縫的交叉點（右下圖 B 中的十字交叉點）。具體操作步驟如下：

1. 實驗動物稱重，進行麻醉；

2. 待實驗動物完全麻醉后，用剃毛器將動物頭頂眼睛至耳朵之間的毛發(fā)剃除干凈；

3. 將麻醉后的實驗動物固定于腦立體定位儀上；

具體操作為：實驗動物眼部涂抹青霉素眼藥膏以保護其雙眼；將門齒掛在門齒掛鉤上，確保頭部保持固定；檢查左右耳桿是否在同一水平上，將左右耳桿通過外耳道插入實驗動物耳內(nèi)。實驗動物固定好的標(biāo)準(zhǔn)為：鼻對正中， 頭部不動，提尾不掉，目測大腦放置水平；

4. 手術(shù)：用碘伏 / 無色葡萄糖氯己定溶液對實驗動物頭皮進行消毒清理，用手術(shù)刀沿中間位置剪開頭皮，用鑷子對表面的結(jié)締組織進行清理，暴露實驗動物的顱骨表面；然后進行調(diào)平，首先找到前囟這個坐標(biāo)，并將其歸零， 然后向左右調(diào)平，使左右兩側(cè)處于同一水平，調(diào)整前后囟，使前后囟也在同一水平；

5. 病毒注射：通過查詢實驗動物的腦立體定位圖譜確定待注射腦區(qū)的位置（下方圖片是大鼠和小鼠的腦譜），并確定其坐標(biāo)值，即 ML 值（X 軸）、AP 值（Y 軸）、DV 值（Z 軸）；根據(jù)目標(biāo)腦區(qū)設(shè)定好坐標(biāo)，移開注射針，用顱骨鉆開窗(由于顱骨薄,故務(wù)必注意顱骨鉆的力度！！),操作時避免傷及腦組織；微量注射器吸取病毒液，隨后固定在定位儀上，根據(jù)設(shè)好的坐標(biāo)進行病毒注射，注射速度控制在 0.1-0.15μL/min，注射劑量視具體實驗而定。注射完畢，留針 10min，以便病毒液充分吸收，然后慢慢回針；

6. 縫合頭皮并消毒 , 完成腦定位注射 ; 將動物從腦立體定位儀取下 , 回籠待蘇醒 ; 動物蘇醒后 , 正常喂養(yǎng) , 病毒注射后 2-4 周可檢測轉(zhuǎn)基因的表達。

提示：若手術(shù)麻醉時間較長，建議不要用酒精消毒，防止酒精揮發(fā)導(dǎo)致動物體溫過低而死亡。手術(shù)過程和蘇醒過程注意保暖。

腦立體定位注射示意圖