細胞攻略：MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細胞)培養(yǎng)教程

細 胞 基 本 信 息

• 細胞名稱： MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細胞)
• 細胞別稱： MM.1S；MM1-S；MM-1S；MM1S
• 細胞貨號： SNL-553
• 生長特性： 半貼壁
• 培養(yǎng)條件： 1640+15% FBS+1% P/S
• 培養(yǎng)環(huán)境: 37℃；5% CO2；飽和濕度
• 細胞簡介: MM.1S細胞源于患有多發(fā)性骨髓瘤的黑人女性患者，CD25+, CD38+, CD52+, CD59+，表達糖皮質(zhì)激素受體（GR），分泌IgGλ輕鏈，對地塞米松敏感。

▲細胞正常生長形態(tài)照片

01、MM.1S細胞培養(yǎng)注意事項
 

• 半換液法：

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
2. 將培養(yǎng)瓶豎立靜置一段時間，待細胞沉底；（肉眼觀察細胞沉底情況）
3. 吸頭緊貼液面，小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管；
4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；
5.原瓶補充一半的新鮮培養(yǎng)基。
tips：建議半換液2-3次后進行離心換液。
 

• 離心換液法：

1. 備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
2. 將所有細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；
3. 900-1000rpm，3min離心；
4. 棄上清，加5mL PBS輕輕重懸細胞進行潤洗，再900-1000rpm，3min離心；
tips：此處PBS潤洗是為了去除細胞碎片，平時培養(yǎng)若細胞碎片不多可以忽略此步驟。
5. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
6.離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
 
03、MM.1S細胞傳代方法
 
1. 備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；使用1ml槍頭輕吹貼壁細胞，如果不好吹下來，可以使用胰酶消化下來，也轉(zhuǎn)移至離心管中；
3. 900-1000rpm，3min離心收集細胞；
4. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）
5. 離心完成后，棄離心管內(nèi)上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
tips：注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉(zhuǎn)速以及時間不要過高，避免細胞受機械損傷。
傳代比例推薦1：2
 
04、MM.1S細胞凍存方法
 
1.準備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等；（試劑需提前預熱）
tips：若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細胞活力穩(wěn)定后再進行凍存。
2. 根據(jù)收集到細胞量，配制相應(yīng)量的凍存液，并準備相應(yīng)數(shù)量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱，代次，凍存時間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO；凍存密度300萬細胞/mL/管。
tips：凍存密度過低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。
3. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；
4. 離心完成后棄上清，加入相應(yīng)量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過多氣泡；
tips：加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。
5. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱進行降溫凍存。
6. 次日（16h-24h后）復蘇一管檢查凍存效果，確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。
 
05、MM.1S細胞復蘇方法
 
1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養(yǎng)基復溫至室溫或37℃，離心機設(shè)置好轉(zhuǎn)速；
2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完全融化，融化時間不超過2min；
tips：若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。
水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。
3. 直接將凍存管900-1000rpm 3min離心，同時在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養(yǎng)瓶中；
5.使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
tips：整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。
 
06、MM.1S細胞收貨攻略
 
1. 拆封包裝盒，確認細胞，說明書等是否齊全，收貨細胞名與所購買細胞是否符合；
2. 觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無漏液，培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現(xiàn)異常及時拍照聯(lián)系銷售人員；
3. 確認無異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓懸浮細胞沉下培養(yǎng)瓶底部；
4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書，知悉細胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項等；
5. 平衡完成后豎立取出細胞培養(yǎng)瓶，此時大部分細胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶內(nèi)，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；
6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細胞，以平穩(wěn)過度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細胞接種至原培養(yǎng)瓶；
7. 觀察細胞，根據(jù)細胞狀態(tài)，以及團塊數(shù)量、大小決定傳代或繼續(xù)培養(yǎng)。
 
常見問題及解決方案
 
培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可通過900-1000rpm，3min離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長，不建議頻繁離心。
 

產(chǎn)品推薦

【SNL-553】MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細胞)

【SNLM-553】MM.1S細胞專用完全培養(yǎng)基