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GRIN Lens植入術(shù)實驗術(shù)前準(zhǔn)備、固定植入及頭件安裝等步驟及流程解析

瀏覽次數(shù)：451　發(fā)布日期：2025-12-29　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

在上一期教程中，我們?yōu)樾∈蟠竽X成功“開了一扇窗”，掌握了在皮層表面建立穩(wěn)定顱窗的技術(shù)，為實時觀測大腦皮層的活動奠定了基礎(chǔ)。

在成功“打開”大腦皮層這扇窗之后，我們的探索將向更深處進(jìn)發(fā)。當(dāng)研究目標(biāo)指向海馬、丘腦等深層核團(tuán)時，需要一項關(guān)鍵技術(shù)將成像視野精準(zhǔn)導(dǎo)入——GRIN Lens植入術(shù)。

作為“雙光子熒光成像小鼠制備手術(shù)”的第二篇，本文將系統(tǒng)講解術(shù)前準(zhǔn)備、GRIN Lens固定與植入、頭件安裝等流程。掌握這一技術(shù)，您將能為深部腦區(qū)的在體、長時程高清成像奠定堅實基礎(chǔ)，從而拓展神經(jīng)環(huán)路的觀測維度。

術(shù)前準(zhǔn)備

手術(shù)器械：兩把精細(xì)鑷、一把雙頭微型刮鏟、一把彈簧剪。
實驗耗材：準(zhǔn)備實驗所需耗材，配制含 1% 頭孢曲松鈉的生理鹽水。
器械消毒：術(shù)中所有使用的器械或植入物使用前需消毒處理，可以用 75% 乙醇消毒，有條件的可以定期高壓滅菌。
手術(shù)臺消毒：手術(shù)臺使用前應(yīng)用 75% 乙醇擦拭消毒，手術(shù)臺應(yīng)墊無菌布、干凈的吸收墊或毛巾，每次手術(shù)結(jié)束后須更換這些材料。

麻醉、固定

將小鼠放入麻醉劑倉室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉，氣體流量與麻醉刻度根據(jù)實驗室的氣麻機(jī)設(shè)置。當(dāng)小鼠出現(xiàn)明顯呼吸減慢、四肢放松，則表明小鼠已進(jìn)入麻醉狀態(tài)。
將麻醉后的小鼠固定于腦立體定位儀上，并維持麻醉，在手術(shù)過程中時刻注意觀察小鼠呼吸。

脫毛

將紅霉素眼膏均勻涂抹于小鼠眼部，用量應(yīng)完全覆蓋小鼠眼部，使眼部不暴露在外。
使用醫(yī)用棉簽蘸取脫毛膏，逆著毛發(fā)生長的方向均勻涂抹于毛發(fā)根部，約2分鐘用棉簽擦拭脫去頭部毛發(fā)。
使用醫(yī)用棉簽蘸取生理鹽水，將小鼠頭部殘留的脫毛膏清洗干凈。
使用碘伏擦拭清潔脫完毛的皮膚。

暴露并清理顱骨

使用彈簧剪剪去小鼠頭皮，充分暴露顱骨區(qū)域。
將所暴露顱骨上的黏膜和兩處肌肉連接處多余脂肪全部剝?nèi)ァ?/li>
使用微型雙頭刮鏟刮除顱骨表面殘余黏膜、結(jié)締組織等。
持洗耳球，將顱骨表面吹至完全干燥。

打孔

以病毒注射孔或定位位點為中心進(jìn)行擴(kuò)孔，擴(kuò)孔尺寸比 GRIN Lens 直徑稍大，保證透鏡能順利植入。
將顱骨鉆速度調(diào)至低檔，持顱骨鉆輕輕打磨，使用洗耳球輕輕吹去碎屑，重復(fù)此操作直至打磨至硬腦膜。

挑碎骨屑

使用精細(xì)鑷將植入孔周圍碎骨片完全挑出。
持精細(xì)鑷將硬腦膜慢慢地揭開。

固定GRIN Lens

準(zhǔn)備內(nèi)徑比 GRIN Lens 直徑稍大的毛細(xì)玻璃管，將 GRIN Lens 的一端和毛細(xì)管的結(jié)合位點用502膠水粘住，等待膠水干燥后觀察 GRIN Lens 和毛細(xì)管是否保持相對水平，防止插入角度產(chǎn)生偏差，并觀察連接是否水平。
將粘住 GRIN Lens 的毛細(xì)管安裝到夾持器上。
將 GRIN Lens 的夾持器安裝在立體定位儀上，重新進(jìn)行調(diào)平定位。

植入GRIN Lens

植入 GRIN Lens，緩慢降至目標(biāo)腦區(qū)上方后停10分鐘，待組織回彈。
使用生物組織膠填充至植入的 GRIN Lens 與顱骨間的縫隙，并將生物組織膠在顱骨上涂滿一層以隔絕顱骨與外部環(huán)境，避免后續(xù)操作對小鼠顱骨的刺激。待生物膠干透后，再涂一層406膠水。
等待406膠水干透后，使用502膠水溶解混勻牙科水泥，使用牙科水泥圍繞 GRIN Lens 對暴露的顱骨進(jìn)行薄薄一層均勻的覆蓋，用于初步固定GRIN Lens，等待牙科水泥固化。

安裝頭件

等待牙科水泥固化后，使用制備好的槍尖向毛細(xì)玻璃管內(nèi)注射解膠劑（如丙酮），溶解 GRIN Lens 和毛細(xì)管之間的502膠水后，可以升高夾持器，將毛細(xì)玻璃管與 GRIN Lens 分離。
用牙科水泥將頭件粘貼在小鼠顱骨之上，頭件中心對齊 GRIN Lens 植入點。使用牙科水泥充分覆蓋暴露的 GRIN Lens 以及端面。
取下小鼠，用牙科水泥充分填補與頭件之間的縫隙或連接薄弱處，加強(qiáng)頭件穩(wěn)固性。
等待牙科水泥干透后，把小鼠放入保溫箱，等待小鼠蘇醒。