細(xì)胞培養(yǎng)基除菌過(guò)濾和上清廢液抽吸兩用真空系統(tǒng)的用途和使用方法介紹

培養(yǎng)基除菌過(guò)濾和上清廢液抽吸兩項(xiàng)操作是細(xì)胞培養(yǎng)中必不可少的兩個(gè)環(huán)節(jié)，一個(gè)在實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備，另一個(gè)則是后期處理。培養(yǎng)基除菌過(guò)濾是一種物理除菌方法，利用微孔濾膜，通常孔徑為0.22µm，將配置好的液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌、真菌等微生物截留，從而獲得無(wú)菌溶液的過(guò)程。這是一種在不破壞熱敏感成分的前提下，實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)基或試劑的無(wú)菌化的方法。高壓蒸汽滅菌會(huì)破壞培養(yǎng)基中的維生素、生長(zhǎng)因子、激素等活性成分，因此除菌過(guò)濾是制備完全培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)方法。而培養(yǎng)基上清廢液抽吸是指在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，移除培養(yǎng)容器（如培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、孔板）中舊的、已耗盡的培養(yǎng)基、細(xì)胞代謝廢物或?qū)嶒?yàn)處理液的操作。為細(xì)胞更換新鮮培養(yǎng)基、進(jìn)行洗滌步驟（如PBS清洗）或收取特定組分（如上清、細(xì)胞）做準(zhǔn)備。是維持細(xì)胞健康、進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)的常規(guī)操作。
       
在許多實(shí)驗(yàn)室中，為了進(jìn)行這兩項(xiàng)操作，往往需要準(zhǔn)備兩套不同設(shè)備分別進(jìn)行這兩項(xiàng)操作，這樣會(huì)增加設(shè)備購(gòu)置個(gè)管理成本。在具體操作時(shí)，無(wú)論是除菌過(guò)濾還是上清廢液抽吸，其本質(zhì)都是利用真空泵產(chǎn)生的負(fù)壓吸引力。區(qū)別在于，除菌過(guò)濾是通過(guò)負(fù)壓（真空泵）或正壓（注射器推注、蠕動(dòng)泵）驅(qū)動(dòng)液體通過(guò)濾膜，一般實(shí)驗(yàn)室由于過(guò)濾量不多，最常用的是連接真空泵的負(fù)壓抽濾裝置；而上清廢液抽吸則是將吸頭置于液面處或緊貼容器側(cè)壁底部，利用負(fù)壓緩慢吸走液體。對(duì)于貼壁細(xì)胞，可稍微傾斜容器，使液體集中在一角后再抽吸。所以通過(guò)精巧的設(shè)計(jì)，可以完全實(shí)現(xiàn)使用一臺(tái)負(fù)壓真空系統(tǒng)，同時(shí)實(shí)現(xiàn)這兩項(xiàng)操作，比如圣斯特的L100SAF培養(yǎng)基除菌過(guò)濾和上清廢液抽吸兩用真空系統(tǒng)，下面我們來(lái)介紹具體操作使用，幫助客戶進(jìn)一步了解此類設(shè)備。
●除菌過(guò)濾的操作：
1.取出47或50 mm的濾膜放到過(guò)濾轉(zhuǎn)接座濾膜支撐片上，注意使其位于支撐片的中央。
2.將過(guò)濾杯放置于濾膜的上方，再以順時(shí)針?lè)较蜉p輕的旋緊，讓過(guò)濾杯卡住過(guò)濾基座。
3.主機(jī)機(jī)體請(qǐng)使用75%的酒精擦拭消毒滅菌；過(guò)濾器、藍(lán)蓋試劑瓶和泵管請(qǐng)使用121度高溫高壓濕熱滅菌，不可以使用消毒劑、有機(jī)溶劑或者其他清潔劑浸泡、清洗，會(huì)造成部件的腐蝕開(kāi)裂。
4.如果使用的是普通濾膜，建議裝入瓶頂式真空過(guò)濾器后再一起滅菌；如果使用的是已滅菌無(wú)菌包裝的濾膜，可以在過(guò)濾器滅菌后再裝入。
5.將過(guò)濾連接座接到GL45標(biāo)準(zhǔn)螺紋口玻璃試劑瓶上，順時(shí)針?lè)较蛐�緊。
6.將真空過(guò)濾瓶插入放置槽內(nèi)，用泵管連接阻水保護(hù)器和過(guò)濾連接座側(cè)邊泵管接口。
7.將要液體倒入過(guò)濾杯中，過(guò)濾過(guò)程中需要接觸的空氣是干凈無(wú)菌的，請(qǐng)?jiān)诼┒飞w上插上0.2 µm的過(guò)濾器，并將漏斗蓋蓋到過(guò)濾杯上，是空氣通過(guò)濾器再推動(dòng)濾液。
8.用泵管連接抽濾泵和過(guò)濾基座接口，啟動(dòng)主機(jī)開(kāi)始過(guò)濾，過(guò)濾完后將關(guān)機(jī)。
9.將過(guò)濾杯從轉(zhuǎn)接過(guò)濾座上以反時(shí)針?lè)较蛐�開(kāi)，請(qǐng)依實(shí)驗(yàn)程序進(jìn)一步處理濾膜。
10.再依實(shí)驗(yàn)程序進(jìn)行收集，分析或處理瓶?jī)?nèi)的溶液。
11.完成過(guò)濾后，請(qǐng)將過(guò)濾器以清水沖干凈，擦干后保存。
●真空集液瓶的鏈接和操作：
1.將導(dǎo)流延長(zhǎng)管接在兩孔吸液蓋內(nèi)側(cè)，并按照螺紋的方向擰在試劑瓶上，組成完整的真空吸液瓶，組合完成將吸液瓶插入主機(jī)的放置槽內(nèi)。
2.連接真空泵管和吸液管：取出真空泵管連接阻水保護(hù)器和兩孔吸液蓋的吸氣端（AIR）；取出吸液管（2米長(zhǎng)一根）連結(jié)手持操作器和兩孔吸液蓋的液體端（LIQ）。
3.完成吸液瓶的組裝后，可以參看下一章節(jié)“吸液套件組的連接和操作使用”，完成吸液套件的連接。
4.開(kāi)機(jī)開(kāi)始吸液，可以參看下一章節(jié)“吸液套件組的連接和操作使用”，使用對(duì)應(yīng)的吸頭適配器來(lái)吸液。。
5.注意觀察廢液瓶的液位，液位過(guò)高時(shí)應(yīng)停止吸液，以免液體倒吸入泵。