建議收藏！NK細(xì)胞常用流式標(biāo)志物大盤點(diǎn)!

自然殺傷細(xì)胞（Natural Killer cells, NK細(xì)胞））是一種先天免疫系統(tǒng)的核心淋巴細(xì)胞，無需預(yù)先致敏即可識別并迅速殺傷病毒感染細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞以及其他異常細(xì)胞，其名稱中的“自然”一詞，正體現(xiàn)了這種與生俱來的快速反應(yīng)能力。NK細(xì)胞來源于骨髓造血干細(xì)胞，在骨髓、淋巴結(jié)等部位成熟，主要分布于外周血（約占淋巴細(xì)胞的5-20%）、脾臟、肝臟，也可浸潤到炎癥或腫瘤組織。在不同的組織中，NK細(xì)胞展現(xiàn)出不同的表型特征和功能特性，即使在同一器官或同一組織內(nèi)，NK細(xì)胞也表現(xiàn)出高度的異質(zhì)性，這意味著它們能夠適應(yīng)各種微環(huán)境并執(zhí)行多種免疫功能，這種多樣性和異質(zhì)性使得NK細(xì)胞能夠在機(jī)體的不同部位發(fā)揮其獨(dú)特的免疫保護(hù)作用。NK細(xì)胞是當(dāng)今免疫治療，尤其是腫瘤治療的前沿方向，而流式細(xì)胞術(shù)得天獨(dú)厚的技術(shù)優(yōu)勢，成為檢測和鑒定NK細(xì)胞最佳方式。

人源NK細(xì)胞流式鑒定： 

人源NK細(xì)胞通常定義為CD3- CD56+，還可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入CD19-（排除B細(xì)胞）、CD14/CD66b（排除單核/粒細(xì)胞）等。

同時根據(jù)CD56和CD16的表達(dá)密度，人外周血NK細(xì)胞可分為兩個主要功能亞群：

• CD56ᵇʳⁱᵍʰᵗ CD16ᵈⁱᵐ/⁻ （細(xì)胞毒功能弱）：約占10%，擅長分泌大量細(xì)胞因子，免疫調(diào)節(jié)功能強(qiáng)。

• CD56ᵈⁱᵐ CD16⁺ （強(qiáng)細(xì)胞毒性）：約占90%，構(gòu)成主要細(xì)胞毒部隊(duì)，殺傷能力極強(qiáng)。

小鼠源NK細(xì)胞流式鑒定： 

由于沒有CD56同源物，常用標(biāo)志物取決于小鼠品系：

1. NK1.1： 最常用，但僅存在于C57BL/6、BALB/c、NOD等少數(shù)品系，在129、FVB等品系中不表達(dá)或表達(dá)極低。

2. CD49b (DX5)： 一種整合素，是跨品系的泛NK細(xì)胞標(biāo)志物，但需要注意它在部分激活的T細(xì)胞上也有低表達(dá)，且在肝臟等組織駐留NK細(xì)胞上表達(dá)可能為陰性。

3. NCR1 (NKp46)：這是目前公認(rèn)的在所有品系小鼠以及人類中都保守的NK細(xì)胞標(biāo)志物，因此，CD3⁻NKp46⁺是鑒定小鼠NK細(xì)胞最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆桨浮?/p>

同時，小鼠NK細(xì)胞還可以根據(jù)CD27（一種TNF受體） 和 CD11b（整合素αM，Mac-1） 的表達(dá)，區(qū)分其發(fā)育和功能差異，進(jìn)而分為不同的亞群。

• CD11blowCD27low：這是NK細(xì)胞發(fā)育的最早階段。

• CD11blowCD27high：代表未成熟的NK細(xì)胞亞群。

• CD11bhighCD27high：這一亞群主要負(fù)責(zé)分泌細(xì)胞因子。

• CD11bhighCD27low：這是具有高細(xì)胞毒活性的成熟NK細(xì)胞亞群。

功能標(biāo)志物鑒定：

除了以上鑒定標(biāo)志物外，也有一些細(xì)胞相應(yīng)的功能標(biāo)志物可以采用流式檢測。

CD69：首選早期指標(biāo)，在NK細(xì)胞被細(xì)胞因子（如IL-2、IL-12、IL-15、IL-18）或靶細(xì)胞刺激后數(shù)小時內(nèi)迅速表達(dá)，是判斷NK細(xì)胞是否進(jìn)入活化狀態(tài)的“開關(guān)”性指標(biāo)。

CD25：高親和力IL-2受體α鏈，在細(xì)胞因子（IL-2）刺激后顯著上調(diào)。是活化增殖的關(guān)鍵標(biāo)志。

NKp44：活化NK細(xì)胞的經(jīng)典受體標(biāo)志，靜息NK幾乎不表達(dá)。常與CD56共標(biāo)記以識別活化亞群。

CD107a（LAMP-1）：脫顆粒標(biāo)志物，在NK細(xì)胞與靶細(xì)胞（如K562）共培養(yǎng)時，加入抗CD107a抗體直接到培養(yǎng)體系中。在脫顆粒過程中，CD107a會暴露在細(xì)胞膜上而被抗體結(jié)合。

IFN-γ：NK細(xì)胞功能中最核心、最常檢測的細(xì)胞因子，一個能產(chǎn)生高水平IFN-γ的NK細(xì)胞，不僅自身有殺傷力，還能有效協(xié)調(diào)整個免疫系統(tǒng)，是NK細(xì)胞多功能性的關(guān)鍵組成部分。

TNF-α：其通過與靶細(xì)胞上的TNF受體結(jié)合，激活Caspase級聯(lián)反應(yīng)，直接誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，這是對穿孔素/顆粒酶途徑的補(bǔ)充。檢測TNF-α可幫助了解NK細(xì)胞是否啟用了穿孔素/顆粒酶之外的凋亡誘導(dǎo)途徑，有時可作為快速反應(yīng)的指標(biāo)，同時其與IFN-γ有強(qiáng)大的協(xié)同作用，兩者結(jié)合能更有效地激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)對腫瘤或感染細(xì)胞的清除。

顆粒酶B：一種絲氨酸蛋白酶，通過穿孔素形成的孔道進(jìn)入靶細(xì)胞后，切割并激活凋亡通路的關(guān)鍵蛋白（如caspase），高效誘導(dǎo)靶細(xì)胞程序性死亡（凋亡），其存在和表達(dá)水平反映了NK細(xì)胞的殺傷潛能。

穿孔素：在靶細(xì)胞膜上聚合形成孔道，使水和離子通過，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹破裂，并為顆粒酶進(jìn)入創(chuàng)造通道，其存在和表達(dá)水平反映了NK細(xì)胞的殺傷潛能。

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