增強(qiáng)AAV對(duì)腎臟組織的感染效率的方法分享

在腎臟研究中常用的AAV載體有AAV2、AAV6、AAV8和AAV9,其中以AAV9居多。啟動(dòng)子方面可以選擇廣譜性啟動(dòng)子CMV，也可以選擇Ksp1.3、NPHS1、ACTHR.Tenascin-C(TNC)、Ggt1等特異性啟動(dòng)子，增強(qiáng)腎臟靶向性，具體可根據(jù)您要轉(zhuǎn)染的腎臟細(xì)胞類型進(jìn)行選擇。

維真案例參考：
糖尿病腎�。―KD）是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥，足細(xì)胞損傷是其關(guān)鍵病理特征。長鏈非編碼RNA 在DKD中表達(dá)異常，但其在足細(xì)胞損傷中的具體作用尚不明確。山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬山東省立醫(yī)院王榮/呂智美教授團(tuán)隊(duì)在Cellular and Molecular Life Sciences (IF 6.2)期刊發(fā)文“LncRNA ENST00000532153.1 alleviates podocyte injury by inhibiting PARP1-mediated PARylation of ATF3 in diabetic kidney disease”，首次闡明lncRNA ENST00000532153.1（簡(jiǎn)稱lncRNA 153） 通過直接結(jié)合PARP1，抑制其介導(dǎo)的ATF3 PAR化修飾，進(jìn)而減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，最終緩解DKD中的足細(xì)胞損傷，提示lncRNA 153和PARP1可能成為DKD治療的潛在靶點(diǎn)。

· 維真助力 ·
病毒產(chǎn)品：AAV9-nphs1-shPARP1、AAV9-NC
注射方式：尾靜脈注射
病毒用量：1×10^12vg per mouse

部分研究結(jié)果
1、LncRNA 153通過調(diào)控PARP1表達(dá)緩解糖尿病腎病足細(xì)胞損傷
研究數(shù)據(jù)證實(shí)LncRNA 153在人類DKD中表達(dá)下調(diào)，并且其表達(dá)量與腎功能指標(biāo)和疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，過表達(dá)LncRNA 153可減輕高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷。通過RNA Pull-down、RNA免疫共沉淀及熒光共定位等分析發(fā)現(xiàn)LncRNA 153與足細(xì)胞中的PARP1相互作用，LncRNA 153的過表達(dá)能降低PARP1的蛋白水平，但不影響其mRNA水平；相反，敲低LncRNA 153則會(huì)增加PARP1的蛋白水平。使用蛋白質(zhì)合成抑制劑CHX進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)表明，LncRNA 153的過表達(dá)會(huì)加速PARP1蛋白的降解，提示LncRNA 153通過影響蛋白穩(wěn)定性來調(diào)控PARP1。為了闡明足細(xì)胞PARP 1在DKD中的功能，體外實(shí)驗(yàn)中敲低PARP1或使用抑制劑PJ34可緩解高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷，相反過表達(dá)PARP1則加重?fù)p傷。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過尾靜脈注射AAV9-nphs1-shPARP1，成功構(gòu)建足細(xì)胞特異性PARP1敲低小鼠模型。在STZ誘導(dǎo)的DKD模型中，與未敲低的DKD小鼠相比，PARP1敲低小鼠腎臟病理損傷得到改善，腎皮質(zhì)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平向正�；貧w。使用PARP1抑制劑PJ34處理同樣產(chǎn)生上述PARP1敲低所帶來的保護(hù)效應(yīng)，這些結(jié)果表明PARP1的激活在DKD相關(guān)的ER應(yīng)激和凋亡中擔(dān)當(dāng)著重要角色。

2、LncRNA 153通過調(diào)節(jié)PARP1和ATF3之間的相互作用參與HG誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷
研究人員進(jìn)一步證實(shí)PARP1可與ATF3發(fā)生相互作用并介導(dǎo)其PAR化修飾，該修飾能激活A(yù)TF3的轉(zhuǎn)錄活性，激活的ATF3會(huì)通過結(jié)合GRP78等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的啟動(dòng)子促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而誘發(fā)足細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，最終加重足細(xì)胞損傷。由于lncRNA 153已被證明與PARP1結(jié)合并調(diào)節(jié)下游基因，因此研究團(tuán)隊(duì)假設(shè)lncRNA可能充當(dāng)PARP1和ATF3之間的連接分子。數(shù)據(jù)顯示，lncRNA 153的過表達(dá)降低了與ATF3結(jié)合的PARP1蛋白的水平，并抑制了由PARP1介導(dǎo)的ATF3的PAR化。同時(shí)，PARP1和ATF3的過表達(dá)顯著增強(qiáng)了GRP78啟動(dòng)子與ATF3之間的相互作用，這種作用被lncRNA 153的異位表達(dá)所抵消。此外，LncRNA 153可以逆轉(zhuǎn)由PARP1/ATF3軸介導(dǎo)的足細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、凋亡和損傷。這些結(jié)果表明lncRNA153在PARP1和ATF3的相互作用中可發(fā)揮重要作用，影響下游基因的表達(dá)。

研究結(jié)論
本研究證實(shí)了糖尿病腎病會(huì)降低足細(xì)胞中l(wèi)ncRNA 153的表達(dá)并增加PARP1的表達(dá)。LncRNA 153直接與PARP1結(jié)合，破壞其與ATF3的相互作用，并抑制ATF3的多聚ADP 核糖化修飾及其活性，從而減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，緩解DKD中的足細(xì)胞損傷。因此，過表達(dá)lncRNA 153或阻斷PARP1–ATF3相互作用可能成為DKD的潛在治療策略。