使用延時無創(chuàng)活細胞成像分析系統(tǒng)進行癌癥研究的實驗步驟介紹
一、實驗準備
儀器設備：將 HoloMonitor® M4 放置在培養(yǎng)箱內，并確保儀器穩(wěn)定，連接好相關電源及數(shù)據(jù)線；準備配套的計算機，配置需滿足系統(tǒng)要求，安裝好 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件 。
實驗材料：選擇合適的細胞培養(yǎng)容器，如 6 孔板、24 孔板、96 孔板或培養(yǎng)皿等（參考推薦容器列表選擇），準備對應容器的 HoloLid™和容器支架；獲取用于實驗的癌細胞系，如乳腺癌細胞系 JIMT-1、三陰性乳腺癌細胞 MDA-MB-231 等，并準備相應的細胞培養(yǎng)基、血清、抗生素等細胞培養(yǎng)試劑。
耗材準備：根據(jù)實驗需求準備移液槍、移液器吸頭、無菌離心管等耗材，所有耗材需經(jīng)過無菌處理。
二、細胞接種與培養(yǎng)
細胞復蘇：從液氮罐中取出凍存的癌細胞，迅速放入 37℃水浴鍋中解凍，解凍后將細胞轉移至離心管，加入適量培養(yǎng)基，1000 - 1500rpm 離心 5 分鐘，棄上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
細胞計數(shù)：使用細胞計數(shù)儀或血球計數(shù)板對重懸后的細胞進行計數(shù)，確定細胞濃度。
細胞接種：根據(jù)實驗設計，將癌細胞以合適的密度接種到培養(yǎng)容器中。如進行細胞增殖實驗，可接種約 5% 匯合度（約 6000 - 11000 個細胞 /cm² ）的細胞 ；接種后輕輕晃動培養(yǎng)容器，使細胞均勻分布。
細胞培養(yǎng)：將接種好細胞的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱，在適宜的溫度（通常為 37℃）、濕度及氣體環(huán)境（5% CO₂ ）下培養(yǎng)，讓細胞貼壁生長 2 - 24 小時 。
三、HoloMonitor® M4 系統(tǒng)設置與校準
啟動軟件：打開計算機，啟動 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件，等待軟件完成初始化，軟件界面加載完成后，確保儀器各組件連接正常。
自動校準：在軟件中選擇自動校準功能，按照軟件提示進行操作，完成校準后，檢查校準結果是否符合要求（如光路校準、焦距校準等，校準成功會有相應提示），確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
四、實驗樣本準備與上機
樣本處理：若實驗涉及藥物處理癌細胞，在細胞貼壁后，根據(jù)實驗設計配置不同濃度的藥物溶液，小心加入到培養(yǎng)容器中，注意藥物的最終工作體積需符合 HoloLid™使用要求（參考不同容器對應的工作體積數(shù)據(jù)） 。
安裝 HoloLid™與放置樣本：將無菌的 HoloLid™替換培養(yǎng)容器的標準蓋子；把裝有細胞樣本的培養(yǎng)容器放置在對應的容器支架上，確保容器平行放置且固定良好（使用多孔板時，將有缺口的一角朝左放置 ）；將容器支架連同樣本小心放置在 HoloMonitor® M4 的載物臺上 。
五、實驗參數(shù)設置與運行
選擇實驗類型：在 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件中，根據(jù)研究目的選擇相應的實驗模塊，如細胞增殖實驗選擇 “Kinetic Proliferation Assay”，細胞遷移實驗選擇 “Single Cell Tracking” 或 “Wound Healing Assay” 等 。
參數(shù)設置：設置成像時間間隔、成像時長等參數(shù)。例如，進行細胞增殖實驗，可設置每隔 1 - 2 小時采集一次圖像，成像時長根據(jù)細胞增殖速度確定，一般為 24 - 96 小時；若進行細胞遷移實驗，對于遷移速度較快的癌細胞，可縮短成像時間間隔至 15 - 30 分鐘 。
儀器設備：將 HoloMonitor® M4 放置在培養(yǎng)箱內，并確保儀器穩(wěn)定，連接好相關電源及數(shù)據(jù)線；準備配套的計算機，配置需滿足系統(tǒng)要求，安裝好 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件 。
實驗材料：選擇合適的細胞培養(yǎng)容器，如 6 孔板、24 孔板、96 孔板或培養(yǎng)皿等（參考推薦容器列表選擇），準備對應容器的 HoloLid™和容器支架；獲取用于實驗的癌細胞系，如乳腺癌細胞系 JIMT-1、三陰性乳腺癌細胞 MDA-MB-231 等，并準備相應的細胞培養(yǎng)基、血清、抗生素等細胞培養(yǎng)試劑。
耗材準備：根據(jù)實驗需求準備移液槍、移液器吸頭、無菌離心管等耗材，所有耗材需經(jīng)過無菌處理。
二、細胞接種與培養(yǎng)
細胞復蘇：從液氮罐中取出凍存的癌細胞，迅速放入 37℃水浴鍋中解凍，解凍后將細胞轉移至離心管，加入適量培養(yǎng)基，1000 - 1500rpm 離心 5 分鐘，棄上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
細胞計數(shù)：使用細胞計數(shù)儀或血球計數(shù)板對重懸后的細胞進行計數(shù)，確定細胞濃度。
細胞接種：根據(jù)實驗設計，將癌細胞以合適的密度接種到培養(yǎng)容器中。如進行細胞增殖實驗，可接種約 5% 匯合度（約 6000 - 11000 個細胞 /cm² ）的細胞 ；接種后輕輕晃動培養(yǎng)容器，使細胞均勻分布。
細胞培養(yǎng)：將接種好細胞的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱，在適宜的溫度（通常為 37℃）、濕度及氣體環(huán)境（5% CO₂ ）下培養(yǎng)，讓細胞貼壁生長 2 - 24 小時 。
三、HoloMonitor® M4 系統(tǒng)設置與校準
啟動軟件：打開計算機，啟動 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件，等待軟件完成初始化，軟件界面加載完成后，確保儀器各組件連接正常。
自動校準：在軟件中選擇自動校準功能，按照軟件提示進行操作，完成校準后，檢查校準結果是否符合要求（如光路校準、焦距校準等，校準成功會有相應提示），確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
四、實驗樣本準備與上機
樣本處理：若實驗涉及藥物處理癌細胞，在細胞貼壁后，根據(jù)實驗設計配置不同濃度的藥物溶液，小心加入到培養(yǎng)容器中，注意藥物的最終工作體積需符合 HoloLid™使用要求（參考不同容器對應的工作體積數(shù)據(jù)） 。
安裝 HoloLid™與放置樣本：將無菌的 HoloLid™替換培養(yǎng)容器的標準蓋子；把裝有細胞樣本的培養(yǎng)容器放置在對應的容器支架上，確保容器平行放置且固定良好（使用多孔板時，將有缺口的一角朝左放置 ）；將容器支架連同樣本小心放置在 HoloMonitor® M4 的載物臺上 。
五、實驗參數(shù)設置與運行
選擇實驗類型：在 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件中，根據(jù)研究目的選擇相應的實驗模塊，如細胞增殖實驗選擇 “Kinetic Proliferation Assay”，細胞遷移實驗選擇 “Single Cell Tracking” 或 “Wound Healing Assay” 等 。
參數(shù)設置：設置成像時間間隔、成像時長等參數(shù)。例如，進行細胞增殖實驗，可設置每隔 1 - 2 小時采集一次圖像，成像時長根據(jù)細胞增殖速度確定，一般為 24 - 96 小時；若進行細胞遷移實驗，對于遷移速度較快的癌細胞，可縮短成像時間間隔至 15 - 30 分鐘 。
開始實驗：確認參數(shù)設置無誤后，點擊 “Start” 按鈕開始實驗，HoloMonitor® M4 開始自動采集細胞圖像，在實驗過程中，可通過軟件界面實時查看細胞狀態(tài)和成像進度 。
六、數(shù)據(jù)采集與分析
數(shù)據(jù)采集：實驗過程中，HoloMonitor® M4 持續(xù)采集細胞的全息圖像，軟件自動記錄相關數(shù)據(jù)，如細胞計數(shù)、細胞匯合度、細胞形態(tài)參數(shù)（面積、體積、厚度等）、細胞運動參數(shù)（遷移距離、速度等）
數(shù)據(jù)分析：實驗結束后，使用 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件的分析功能對數(shù)據(jù)進行處理。如在細胞增殖實驗中，軟件自動生成細胞數(shù)量隨時間變化的曲線、細胞匯合度變化曲線；在細胞遷移實驗中，分析細胞的遷移軌跡、計算遷移速度和遷移方向等；還可利用軟件的導出功能，將數(shù)據(jù)導出至 Excel 等軟件進行進一步的統(tǒng)計學分析，如計算平均值、標準差，進行顯著性差異檢驗等 。
數(shù)據(jù)可視化：利用軟件生成彩色視頻和圖像，直觀展示癌細胞在不同時間點的形態(tài)變化、運動軌跡等；也可將處理后的數(shù)據(jù)制作成圖表（如折線圖、柱狀圖），清晰呈現(xiàn)實驗結果，用于撰寫研究報告或論文發(fā)表 。
七、使用優(yōu)勢
節(jié)省資源成本：無需昂貴消耗品與標記試劑，減少動手時間與細胞浪費，單次實驗數(shù)據(jù)可重復用于多維度分析。
結果精準可靠：實時連續(xù)成像（圖像捕獲率 1image/s），避免手動取樣誤差，自動分析減少用戶偏見，直接獲取定量測量結果。
細胞友好性高：無標記、無光毒性，成像后細胞可繼續(xù)用于后續(xù)研究，尤其適配誘導多能干細胞（iPS）、原代細胞等脆弱細胞類型。
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