瑞孚迪均相技術(shù)平臺在PROTAC檢測中的優(yōu)勢及應(yīng)用

PROTAC技術(shù)近年來發(fā)展迅速，在解決傳統(tǒng)"不可成藥"靶點(diǎn)、克服臨床耐藥及提高靶向選擇性方面展現(xiàn)出巨大潛力。雖然目前尚未有PROTAC療法正式上市，但超過25種PROTAC候選藥物正處于臨床試驗(yàn)階段，其應(yīng)用范圍包括血液系統(tǒng)惡性腫瘤、實(shí)體瘤和自身免疫性疾病等。然而，PROTAC分子的復(fù)雜作用機(jī)制也給檢測和篩選帶來了巨大挑戰(zhàn)。正是在這樣的背景下，瑞孚迪（Revvity）公司推出的HTRF（均相時(shí)間分辨熒光）和Alpha（Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay）技術(shù)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，為PROTAC研發(fā)提供了全方位的檢測解決方案。

PROTAC檢測特殊挑戰(zhàn)
PROTAC分子的功能依賴于其誘導(dǎo)靶蛋白與E3連接酶形成三元復(fù)合物，進(jìn)而觸發(fā)泛素-蛋白酶體降解途徑，因此其活性評估需綜合考察二元結(jié)合、三元復(fù)合物形成、泛素化效率及降解動(dòng)力學(xué)等多個(gè)維度。傳統(tǒng)檢測方法在此背景下顯現(xiàn)出明顯局限性：

為全面評估PROTAC活性，現(xiàn)代檢測技術(shù)需滿足以下要求：

• 檢測二元和三元相互作用
• 定量分析蛋白降解動(dòng)力學(xué)
• 適應(yīng)高通量篩選需求

均相技術(shù)平臺獨(dú)特優(yōu)勢
瑞孚迪的HTRF和Alpha技術(shù)均采用均相檢測格式，無需分離步驟即可直接測量溶液中的生物分子相互作用，這一特性使它們在PROTAC研究中具有獨(dú)特價(jià)值：

01高效、無需洗滌的檢測流程
采用 “Add-Read” 的均相工作模式，徹底摒棄了ELISA、Western Blot所需的繁瑣步驟以及HiBiT技術(shù)需要前期構(gòu)建細(xì)胞株的情況，極大簡化了實(shí)驗(yàn)操作，提高了檢測效率，特別適合高通量篩選。

2出色的靈敏度和穩(wěn)定性
HTRF技術(shù)基于時(shí)間分辨熒光原理，有效消除背景干擾；Alpha技術(shù)基于微珠的化學(xué)放大機(jī)制，可檢測皮摩爾級別的微弱相互作用，相較于SPR技術(shù)，這些均相方法在檢測低親和力的蛋白相互作用和復(fù)雜的三元復(fù)合物方面表現(xiàn)出顯著的靈敏度優(yōu)勢，能夠有效解決SPR在此類應(yīng)用中信號響應(yīng)不足的局限性。

3平臺通用性高，一技多用
僅需一種均相技術(shù)平臺，即可無縫評估PROTAC功能的三個(gè)核心指標(biāo)：二元結(jié)合親和力、三元復(fù)合物形成效率與靶蛋白降解水平。這種集成化能力打破了傳統(tǒng)方法（如SPR、ELISA、Western Blot分別用于不同指標(biāo)）的壁壘，確保了數(shù)據(jù)的一致性和可比性，極大簡化了實(shí)驗(yàn)流程并加速了研發(fā)進(jìn)程。

覆蓋PROTAC研發(fā)全流程

二元相互作用：奠定PROTAC功能的分子基礎(chǔ)
PROTAC分子的功能基礎(chǔ)是其同時(shí)與靶蛋白和E3連接酶的結(jié)合能力。瑞孚迪的均相技術(shù)在此環(huán)節(jié)展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢，使研究人員能夠研究分子相互作用，無需分離洗滌步驟，最大程度保持了相互作用的真實(shí)性。

HTRF Cereblon binding kit檢測原理圖（左）和數(shù)據(jù)（右）

三元復(fù)合物形成：解鎖PROTAC機(jī)制的關(guān)鍵步驟
PROTAC技術(shù)的核心在于其能否有效介導(dǎo)并穩(wěn)定靶蛋白與E3連接酶之間的相互作用，形成三元復(fù)合物。瑞孚迪的Toolbox試劑盒通過雙抗體識別策略，可特異性、高通量的檢測三元復(fù)合物的組裝效率與穩(wěn)定性。

HTRF BTK-WT/CRBN PROTAC binding kit檢測原理圖（左）和數(shù)據(jù)（右）

目標(biāo)蛋白降解動(dòng)力學(xué)：評估PROTAC的最終功效
蛋白降解是PROTAC功能的終極體現(xiàn)，也是評價(jià)其效能的黃金標(biāo)準(zhǔn)。瑞孚迪的蛋白檢測試劑盒無需基因工程標(biāo)記，即可直接在天然細(xì)胞體系中定量分析蛋白降解過程，準(zhǔn)確計(jì)算DC50、Dmax等關(guān)鍵參數(shù)。該無標(biāo)記優(yōu)勢使其能夠應(yīng)用于原代細(xì)胞和組織樣本檢測，為PROTAC研究提供更接近生理環(huán)境的藥效學(xué)數(shù)據(jù)。細(xì)胞消化太耗時(shí)? TryPLUS消化液免終止、免冷凍，隨取隨用，一步搞定!

AlphaLISA SureFire Ultra Human Total KRAS Detection Kit檢測原理圖

未來展望
隨著PROTAC技術(shù)的不斷發(fā)展，瑞孚迪的均相技術(shù)平臺為PROTAC研究人員提供了從早期發(fā)現(xiàn)到臨床前研究的全方位解決方案。專用檢測試劑盒和優(yōu)化方案將進(jìn)一步增強(qiáng)其在PROTAC研究中的適用性，不僅加速了PROTAC藥物的研發(fā)進(jìn)程，更為理解蛋白降解機(jī)制提供了強(qiáng)大工具，有望推動(dòng)更多突破性療法的誕生。

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