微透析技術(shù)的一些常見問題答疑

瀏覽次數(shù)：842　發(fā)布日期：2024-1-26　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

微透析 (Microdialysis)技術(shù)是一種將灌流取樣和透析技術(shù)結(jié)合起來并逐漸完善的一種從生物活體內(nèi)進(jìn)行動(dòng)態(tài)微量生化取樣的新技術(shù)。

1、什么是回收率？

某一特定物質(zhì)的回收率定義為透析液中的濃度與組織液中濃度的百分比。當(dāng)流速接近零時(shí)，相對回收率將接近 100%，并隨著流速的增加而降低，它通常以百分比表示。絕對回收率定義為在規(guī)定的時(shí)間段內(nèi)回收的物質(zhì)的質(zhì)量。當(dāng)流速為零時(shí)，它也為零，在較高流速時(shí)將達(dá)到最大值。

2、哪些因素會影響回收率？

物質(zhì)從組織中的絕對回收率（mol/時(shí)間單位）取決于（1）透析膜的“截留”（通常定義為 80% 的分子無法通過膜的道爾頓分子量）,（2）膜的長度和直徑,（3）灌注液的流速（4）化合物通過細(xì)胞外液的擴(kuò)散系數(shù)。（5）其他因素，如培養(yǎng)基的pH值、物質(zhì)的降解也可能影響回收率。對于從探針進(jìn)入組織的物質(zhì)來說，情況正好相反。

3、膜長度和流速如何影響回收率？

膜越長，流速越低，回收率越高

4、灌注液應(yīng)該如何配制？

理想情況下，灌注液應(yīng)盡可能接近細(xì)胞外液的成分。不過可通過改變鈉、鉀或鈣的濃度，來改變所研究部位膜的功能。CMA 產(chǎn)品有外周組織灌流液 T1和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦組織灌流液。

5、中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌注液的pH值是多少？

為了與腦組織液具有相同的pH 值，中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌流液是非緩沖溶液。故其 pH 值在 5-8 之間。

6、中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌注液的pH值如何影響組織？

由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)灌流液無緩沖作用，所以它不會影響組織的pH。灌流液的pH值與周圍組織的pH值相同。但是，膜對組織中的緩沖物質(zhì)的回收率不同，會對組織的pH 產(chǎn)生較小的影響。

7、灌流液的流速設(shè)定為多少?

如果要在單位時(shí)間內(nèi)去除或引入盡可能多的分子，應(yīng)使用高流速。若想獲得高濃度的透析液（高回收率），應(yīng)使用低流速。但需要注意的是低流速收集的透析液體積較小，因此在設(shè)定流速時(shí)還要考慮分析樣本所需用的體積。

8、獲得穩(wěn)態(tài)平衡需要多長時(shí)間？

將探針植入組織總是會造成一定的傷害，細(xì)胞功能也不會立即恢復(fù)。通常灌流一個(gè)小時(shí)可達(dá)到“基線條件”。

9、如果探針的截留量是20,000 Da,為什么分子量是20,000 Da的物質(zhì)的回收率不是100%？

分子通過膜的能力隨著分子量的增加呈對數(shù)遞減。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)可得知，當(dāng)使用截留量20,000 Da的膜時(shí)，大多數(shù)分子量高達(dá)5,000 Da的物質(zhì)都可以進(jìn)行透析。這種情況完全依賴于分析方法的實(shí)準(zhǔn)確性和靈敏度。

10、什么原因?qū)е铝魉馘e(cuò)誤？

可能是未將正在使用的注射器校準(zhǔn)泵。注射器可能泄漏，或者沒有使用 CMA 配套的注射器。

11、什么原因?qū)е挛⑼肝鰳悠敷w積不足？

探針漏液，管路被堵塞，泵可能出了問題，或者管路接頭漏液。

12、為什么回收率與相對回收率如此之低？

回收率的濃度永遠(yuǎn)不會與您在培養(yǎng)基中看到的相似。除非您的介質(zhì)和灌注液之間完全平衡，否則透析液中給定物質(zhì)的濃度將低于其在溶液中的實(shí)際濃度。這同樣適用于體內(nèi)和原位實(shí)驗(yàn)。

透析液與組織（或溶液）濃度之間的關(guān)系稱為“相對回收率”，定義為透析液/間質(zhì)濃度比值，以百分比表示：

相對回收率= Cmd/Cint=1-exp-K0 A/F

其中 Cmd 和 Cint 分別是微透析液和間質(zhì)（組織或溶液）中分析物的濃度，K0 是平均傳質(zhì)，A 是膜表面，F(xiàn) 是透析液流速。

綜上所述，增加膜表面或降低流速會得到更高的相對回收率以及膜孔徑大小。然而，由于微透析膜上沒有完全的平衡，透析液中被測物質(zhì)的濃度永遠(yuǎn)不會等于真正的間質(zhì)濃度。

如果您需要知道間質(zhì)濃度，可以使用其他方法進(jìn)行計(jì)算，例如無凈通量法。