4T1-BSD+ffluc1

一、細胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件	空氣，95%；CO2，5% ；37℃
生長特性	貼壁生長	凍存條件	無血清凍存液（貨號：C7001）
培養(yǎng)體系	1640+10%FBS+1%P/S
穩(wěn)轉(zhuǎn)基因	熒光素酶，ffluc1	序列	QBQ18417.1
備注	混合穩(wěn)轉(zhuǎn)，BSD R（殺稻瘟菌素抗性）傳5-8代用相應(yīng)抗性藥物篩選一次（濃度4~10μg/ml） 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。

二、細胞收貨后處理
A、復(fù)蘇細胞處理方法：培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，嚴格無菌后將細胞瓶放置培養(yǎng)箱中靜置2-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。靜置后顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
B、凍存細胞處理方法：收到細胞后，觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好無損是否有解凍情況，若發(fā)現(xiàn)干冰完全汽化或凍存管有解凍破損現(xiàn)象，請及時拍照并與我們聯(lián)系。如果細胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系，則默認為收貨良好。復(fù)蘇第一管如有活性問題，請及時聯(lián)系我們，技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管，未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
三、細胞培養(yǎng)步驟
a、細胞傳代：如細胞密度超過80%，即可進行傳代培養(yǎng)，步驟如下：
1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2) 加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置培養(yǎng)箱中消化 1min ，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5-6ml含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化；
3) 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000 rpm離心5-8min，棄去上清液，補加1-2mL完全培養(yǎng)基后吹勻；
4) 按5-6mL每瓶補加完全培養(yǎng)基，將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培養(yǎng)基的6cm培養(yǎng)皿中或者T25培養(yǎng)瓶中。
（即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿）
b、細胞凍存：細胞收集參照傳代步驟，按凍存數(shù)量（推薦每支凍存管5×10⁶左右細胞數(shù)量凍存），加入1ml的我司無血清凍存液（貨號：C7001），輕輕混勻后，放-80℃冰箱，24小時后轉(zhuǎn)入液氮罐中。
C、細胞復(fù)蘇：從液氮罐或-80℃冰箱中找到需要復(fù)蘇的細胞，水浴鍋提前打開預(yù)熱37℃。
1) 將凍存細胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2) 將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm離心5min；
3) 棄去上清液，補加5mL完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中或6cm皿中，培養(yǎng)過夜，第二天換液并檢查細胞密度。
 ffluc1標(biāo)記4T1穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株培養(yǎng)說明書